BI-1作为酵母双杂交系统诱饵的载体构建

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目的研究BI-1完整编码区能否在酵母细胞中表达,排除自身激活作用,并验证它能否用于酵母双杂交系统。方法以人正常肺组织cDNA为模板,扩增BI-1完整编码区,经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切后克隆到酵母双杂交系统诱饵载体pGBKT7上,构建诱饵蛋白载体pGBKT7-BI-1,转化酵母细胞,通过β-半乳糖苷酶活性分析验证有无自激活,Western印迹验证其表达。结果DNA测序显示BI-1编码区内无突变,β-半乳糖苷酶活性分析显示转入pGBKT7-BI-1和阴性对照的酵母菌落没有激活报告基因LacZ,而阳性对照菌落呈现蓝色。结论含有BI-1完整编码区的诱饵载体不存在自身激活作用,并能在酵母细胞中表达BI-1蛋白,能够应用于酵母双杂交系统筛选相互作用蛋白。
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