【摘 要】
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目的 探索小分子干扰RNA(SiRNA)沉默A549细胞肺表面活性蛋白A(SP-A)基因后高体积分数氧(高氧)对其的影响,探讨SP-A蛋白在高氧肺损伤中的作用.方法 体外传代培养A549细胞,将细
【机 构】
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铜仁市人民医院新生儿科,华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科
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目的 探索小分子干扰RNA(SiRNA)沉默A549细胞肺表面活性蛋白A(SP-A)基因后高体积分数氧(高氧)对其的影响,探讨SP-A蛋白在高氧肺损伤中的作用.方法 体外传代培养A549细胞,将细胞随机分为沉默组、对照组.以Lipofectamine2000转染特异性SiRNA SP-A转入A549细胞,持续置于高氧(950 mL/LO2和50 mL/L C02)中,分别于培养48 h、72 h、96 h提取A549细胞的总蛋白,收集培养上清.采用Westernblot检测SP-A蛋白的表达,噻唑兰(MTr)检测细胞增殖能力,硫代巴比妥酸(TAB)比色法检测培养基上清中丙二醛(MDA)水平.结果 序列特异性SiRNA可显著沉默SP-A基因表达,其中SiRNA SP-A2的沉默效率最高(97％).高氧干预下,与对照组相比,沉默组A549细胞SP-A蛋白表达在高氧48 h、72 h时均显著减少(P均＜0.05),沉默组A549细胞增殖能力在高氧48 h、72 h、96 h均受到明显抑制(P均＜0.05).但2组间培养基中MDA水平未见明显差异(P＞0.05).结论 SP-A基因沉默后A549细胞抗高氧能力下降,表明SP-A可能在高氧肺损伤过程起保护作用.
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