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美国农业部国家家禽改良计划（US Department of Agriculture National Poultry ImprovementPlan，NPIP）是美国联邦政府、各州政府与行业组织合作的一个综合性项目，旨在消除由包括鸡白痢沙门氏茵和鸡伤寒沙门氏菌等在内的致病菌所引起的垂直传播性疾病。
中图分类号：S858.28
文献标志码：C
文章编号：1001-0769（2018）07-0009-05
在最近几年里，美国农业部国家家禽改良计划（US Department of Agriculture NationalPoultry Improvement Plan， NPIP）在其家禽病原体监测对象中增加了对鸡毒支原体（Mycoplasma
Gallisepticum，MG）、滑液囊支原体（Mycoplasma Svnoviae，MS）、肠炎沙门氏菌（Salmonella Enteridi tis，SE）和低致病性禽流感（Low Pathogenic Avian Influenza，LPAI）等的监控，以作为验证种鸡群并鼓励养鸡生产者净化这些病原体的手段。
NPIP还明确了项目中所涉及病原体的采样方法和特异性诊断手段。虽然该项目是自愿参加的，但它仍然是美国种鸡和商品小母鸡出口认证及国内销售的黄金标准。
其他国家和地区的政府机构也有与之类似的项目，以保证种鸡群没有各种类型的疾病。以下种鸡群疾病监测和检测方法都是在NPIP的基础上建立的，且仅作为指导方针使用。
由于各地疾病流行情况、实验室的数量和/或出口（或当地市场）需求的不同，相关人员可能需要准备可替代的检测和认证方法。
1 兽医检查
美国农业部认证的兽医至少每隔30 d就要对美国海兰公司（Hy-Line）的所有父母代种鸡（Parent Stock，PS）和PS原种场进行检查，以便为产品的出口做好准备。
兽医检查项目包括：家禽生产力、疾病临床症状以及是否遵守动物福利规定。鸡场管理员需要每天报告重要的生产数据，并提醒兽医鸡群的死亡率是否增加、产蛋率是否下降、鸡蛋大小是否减小、采食量或饮水量是否减少以及是否出现临床疾病或其他异常迹象。
很多重要的家禽疾病仅仅由对鸡群进行定期检查的兽医进行监测。
2 沙门氏菌
肠炎沙门氏菌是一种重要的人食源性致病菌，它通常通过食用蛋传给人。控制种鸡群中肠炎沙门氏菌和其他重要沙门氏菌菌种是控制这些病原菌在商品鸡群中传播的第一步（图1）。
在其他国家，其他类型的沙门氏菌也受到当地政府的监测和控制。
2.1收集病原菌
2.1.1孵化场
在每个出雏箱中，对来自全部种鸡群的出雏筐至少采集1个手持拭子（1支拭子）。
拭子采集的范围应包括出雏筐的筐底、死胚和蛋壳。
拭子应放入含有合适培养基（双倍脱脂牛奶）的试管中。
样本送至实验室进行细菌培养或聚合酶链式反应（Polvmerase Chain Reaction，PCR）检测。
2.1.2种鸡场
雏鸡入舍前，在对鸡舍进行清洁和消毒后应采集并检测环境拭子，以确定该鸡舍无沙门氏菌污染。
采用细菌培养法或PCR法检测雏鸡运送箱垫纸上的胎便和/或第1周死亡的雏鸡。
每4周从种鸡场收集环境拭子样本。
●采用地面或板条地板的鸡舍：使用短靴拭子（bootie swab）（4支拭子）采集地面/板条地板区上的细菌检测样本。用手持拭子采集鸡蛋运送带（1支拭子）和产蛋箱垫子（1支拭子）上的细菌检测样本。
●笼养鸡舍：
使用短靴拭子采集走道（4支拭子）上的细菌检测样本。用手持拭子采集鸡粪传送带或粪池（1个拭子）、鸡蛋运送带（1支拭子）和鸡笼地板（1支拭子）上的细菌检测样本。
拭子放入含有合适培养基（双倍脱脂牛奶）的试管中。
根据NPIP指南确定鸡群中沙门氏菌的流行状态：
如果PCR和/或细菌培养的检测结果为阴性，则该鸡群可认定为沙门氏菌阴性鸡群。
如果PCR检测结果不确定，则应对该鸡群重新检测。
如果PCR检测结果为阳性，则需要对环境的细菌检测样本进行細菌培养。
如果环境检测样本的细菌培养结果为阳性，则应对菌落进行血清分型以鉴定沙门氏菌的类型。
细菌培养需重复进行以便验证结果的正确性，并且在重复培养试验中，该鸡群应当作已受感染而尚未确定检测结果的鸡群处理。
采集60羽鸡的肠道和其他组织样本进行沙门氏菌培养，具体如下：
●肠道组织（与其他器官组织分开收集样本以避免交叉污染）：消化道组织包括嗉囊壁、十二指肠、空肠、盲肠、盲肠扁桃体和直肠/泄殖腔。
●其他器官：肝脏、心脏、心包膜、脾脏、
肺脏、肾脏、腹膜、胆囊、输卵管、畸形卵或睾丸以及发炎或未吸收的卵黄囊。
将这些器官的样本混合在一起并作为一个单独的样本进行处理。
如果这些器官或肠道培养物的检测结果呈肠炎沙门氏菌或官方监管的其他类型沙门氏菌阳性，则该鸡群可认定为沙门氏菌阳性鸡群。
2.2鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌
鸡白痢沙门氏菌可引起青年鸡白痢（白色细菌性腹泻），鸡伤寒沙门氏菌也可导致幼龄雏鸡大量死亡。
这两种细菌都能够垂直传播，且难以从环境样本中培养出或检测出。
在鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌感染检测中，最常用的方法是快速全血平板凝集试验（图2）。 在鸡16周龄时，使用全血平板凝集试验对300羽鸡（每个鸡群采集300份全血样本）进行检测。
首次合格检测完成后，对该鸡群进行重复检测，方法是用全血平板凝集试验检测300羽鸡（每个鸡群采集300份全血样本）。
在接种沙门氏菌灭活苗或弱毒苗的鸡群中，留下300羽不予接种疫苗并做好标记，在16周龄对这些标记的鸡进行检测和鉴定，12个月后再次检测。
应按照NPIP指南确定鸡群沙门氏菌感染状况，具体如下：
●如果全血平板凝集试验结果为阴性，则该鸡群可认定为鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌阴性鸡群。
●如果全血平板凝集试验结果为阳性，则从鸡群中取25羽进行安乐死。从处死的每羽鸡中采集肠道和其他器官组织样本进行鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌培养，具体如下：
●肠道组织混合样本（与其他器官组织分开收集样本以避免交叉污染）：采集嗉囊壁、十二指肠、空肠、盲肠、盲肠扁桃体和直肠/泄殖腔的样本。将这些器官的样本混合在一起并作为一个单独的样本进行处理，但不要将不同鸡的样本混到一起。
○其他器官组织（与肠道组织分开收集样本以避免交叉污染）：采集肝脏、心脏、心包膜、脾脏、肺脏、肾脏、腹膜、胆囊、输卵管、畸形卵或睾丸以及发炎或未吸收的卵黄囊样本。将这些器官的样本混合在一起并作为一个单独样本进行处理，但不要将不同鸡的样本混在一起。
○对任何有明显异常的组织用拭子取样以进行细菌培养。
●如果该器官或肠道的细菌培养结果为阳性，那么该鸡群可认定为鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌阳性鸡群。
根据当地法规，确诊为鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌阳性的鸡群应处以安乐死。
2.3鸡毒支原体和滑液囊支原体
鸡毒支原体和滑液囊支原体都可以从种母鸡向雏鸡垂直传播，导致雏鸡质量较差，发生呼吸道疾病和滑膜炎，并且降低未来的生产力。加入NPIP的种鸡场必须净化鸡毒支原体和滑液囊支原体（图3）。
在鸡16周龄，用血清平板凝集试验或抗体酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked ImmunosorbentAssay，ELISA）对150羽鸡进行鸡毒支原体和滑液囊支原体检测（每个鸡群采集150份血清样本）。
在产蛋阶段，每隔90 d检测75羽鸡（75份血清样本）或每隔30 d检测25羽鸡（25份血清样本）。
应按照NPIP指南确定鸡群鸡毒支原体和滑液囊支原体感染状况：
●如果ELISA或血清平板凝集试验结果为阴性，那么该鸡群可认定为鸡毒支原体和滑液囊支原体阴性鸡群。
●如果ELISA或血清平板测试结果为阳性，那么必须至少对25份样本进行血凝抑制试验或对口咽拭子进行分子检测。如果血凝抑制试验结果的血清滴度为1：80或更高，那么该鸡群可确诊为阳性鸡群;如果血清滴度为1：40，则可认定为疑似病例，需在最终判断前进一步检测以便确诊。
在疾病流行的高风险地区，检测间隔应缩短至每2周进行一次以更快速地检测感染状况。
根据当地法规，确诊为阳性的鸡群应进行扑杀。
3 禽流感
在NPIP中增加了对低致病性禽流感（Low Pathogenic Avian Influenza， LPAI）監测的项目，一方面是为了增强对禽流感的监测工作，另一方面是为了补偿那些必须扑杀的H5或H7 LPAI阳性鸡群的生产者。监测低致病性H5/H7 LPAI感染能更容易地预防可以引发高致病性禽流感（Highly Pathogenic AvianInfluenza，HPAI）的病毒基因重组事件。在美国，仍然由美国农业部动物卫生检查局负责HPAI响应，并要求受感染鸡群得到可控的处置（图4）。
在鸡16周龄时，使用抗体ELISA或琼脂凝胶免疫扩散法（Agar Gel Immunodiffusion，AGID）对30羽鸡进行检测。
16周龄后，用AGID或ELISA法，每隔90 d对30羽鸡（30份血清样本）或每隔30 d对10羽鸡（10份血清样本）进行LPAI病毒检测。
应按照NPIP指南确定鸡群的禽流感状况：
●如果ELISA或AGID检测结果为阴性，则该鸡群可认定为禽流感阴性鸡群。
●如果ELISA或AGID检测结果为阳性，那么需要进行AGID或分子检测（PCR）。采集口咽拭子，每5个拭子放入3 mL（或者每11个拭子放入5 mL）合适的转移介质（脑心浸出物培养液）中。
●如果AGID或PCR检测结果为阳性，则应将血清样本和口咽/气管拭子送往样本来源国认可的国家实验室（在美国，应送至美国兽医服务实验室）进行验证和血清分型。
在疾病流行的高风险地区，应缩短检测间隔时间以便能快速检测感染状况。
根据当地法规，确诊为LPAI的鸡群应进行扑杀。
4 监测安排
表1给出了对种鸡群进行上述疾病监控的取样监测计划。
更严格的监测计划需要投入更多的资金，但可以更快地确定潜在的疾病威胁。
提高检测频率、扩大样本规模以及使用更敏感的筛选试验能够获得更快速的响应，并且可以降低疾病对生产连续性、客户信心以及公共关系的影响。
如果某种疾病在当地的流行率较高，采用更为密集的检测方案可能会更有利。
中图分类号：S858.28
文献标志码：C
文章编号：1001-0769（2018）07-0009-05
在最近几年里，美国农业部国家家禽改良计划（US Department of Agriculture NationalPoultry Improvement Plan， NPIP）在其家禽病原体监测对象中增加了对鸡毒支原体（Mycoplasma
Gallisepticum，MG）、滑液囊支原体（Mycoplasma Svnoviae，MS）、肠炎沙门氏菌（Salmonella Enteridi tis，SE）和低致病性禽流感（Low Pathogenic Avian Influenza，LPAI）等的监控，以作为验证种鸡群并鼓励养鸡生产者净化这些病原体的手段。
NPIP还明确了项目中所涉及病原体的采样方法和特异性诊断手段。虽然该项目是自愿参加的，但它仍然是美国种鸡和商品小母鸡出口认证及国内销售的黄金标准。
其他国家和地区的政府机构也有与之类似的项目，以保证种鸡群没有各种类型的疾病。以下种鸡群疾病监测和检测方法都是在NPIP的基础上建立的，且仅作为指导方针使用。
由于各地疾病流行情况、实验室的数量和/或出口（或当地市场）需求的不同，相关人员可能需要准备可替代的检测和认证方法。
1 兽医检查
美国农业部认证的兽医至少每隔30 d就要对美国海兰公司（Hy-Line）的所有父母代种鸡（Parent Stock，PS）和PS原种场进行检查，以便为产品的出口做好准备。
兽医检查项目包括：家禽生产力、疾病临床症状以及是否遵守动物福利规定。鸡场管理员需要每天报告重要的生产数据，并提醒兽医鸡群的死亡率是否增加、产蛋率是否下降、鸡蛋大小是否减小、采食量或饮水量是否减少以及是否出现临床疾病或其他异常迹象。
很多重要的家禽疾病仅仅由对鸡群进行定期检查的兽医进行监测。
2 沙门氏菌
肠炎沙门氏菌是一种重要的人食源性致病菌，它通常通过食用蛋传给人。控制种鸡群中肠炎沙门氏菌和其他重要沙门氏菌菌种是控制这些病原菌在商品鸡群中传播的第一步（图1）。
在其他国家，其他类型的沙门氏菌也受到当地政府的监测和控制。
2.1收集病原菌
2.1.1孵化场
在每个出雏箱中，对来自全部种鸡群的出雏筐至少采集1个手持拭子（1支拭子）。
拭子采集的范围应包括出雏筐的筐底、死胚和蛋壳。
拭子应放入含有合适培养基（双倍脱脂牛奶）的试管中。
样本送至实验室进行细菌培养或聚合酶链式反应（Polvmerase Chain Reaction，PCR）检测。
2.1.2种鸡场
雏鸡入舍前，在对鸡舍进行清洁和消毒后应采集并检测环境拭子，以确定该鸡舍无沙门氏菌污染。
采用细菌培养法或PCR法检测雏鸡运送箱垫纸上的胎便和/或第1周死亡的雏鸡。
每4周从种鸡场收集环境拭子样本。
●采用地面或板条地板的鸡舍：使用短靴拭子（bootie swab）（4支拭子）采集地面/板条地板区上的细菌检测样本。用手持拭子采集鸡蛋运送带（1支拭子）和产蛋箱垫子（1支拭子）上的细菌检测样本。
●笼养鸡舍：
使用短靴拭子采集走道（4支拭子）上的细菌检测样本。用手持拭子采集鸡粪传送带或粪池（1个拭子）、鸡蛋运送带（1支拭子）和鸡笼地板（1支拭子）上的细菌检测样本。
拭子放入含有合适培养基（双倍脱脂牛奶）的试管中。
根据NPIP指南确定鸡群中沙门氏菌的流行状态：
如果PCR和/或细菌培养的检测结果为阴性，则该鸡群可认定为沙门氏菌阴性鸡群。
如果PCR检测结果不确定，则应对该鸡群重新检测。
如果PCR检测结果为阳性，则需要对环境的细菌检测样本进行細菌培养。
如果环境检测样本的细菌培养结果为阳性，则应对菌落进行血清分型以鉴定沙门氏菌的类型。
细菌培养需重复进行以便验证结果的正确性，并且在重复培养试验中，该鸡群应当作已受感染而尚未确定检测结果的鸡群处理。
采集60羽鸡的肠道和其他组织样本进行沙门氏菌培养，具体如下：
●肠道组织（与其他器官组织分开收集样本以避免交叉污染）：消化道组织包括嗉囊壁、十二指肠、空肠、盲肠、盲肠扁桃体和直肠/泄殖腔。
●其他器官：肝脏、心脏、心包膜、脾脏、
肺脏、肾脏、腹膜、胆囊、输卵管、畸形卵或睾丸以及发炎或未吸收的卵黄囊。
将这些器官的样本混合在一起并作为一个单独的样本进行处理。
如果这些器官或肠道培养物的检测结果呈肠炎沙门氏菌或官方监管的其他类型沙门氏菌阳性，则该鸡群可认定为沙门氏菌阳性鸡群。
2.2鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌
鸡白痢沙门氏菌可引起青年鸡白痢（白色细菌性腹泻），鸡伤寒沙门氏菌也可导致幼龄雏鸡大量死亡。
这两种细菌都能够垂直传播，且难以从环境样本中培养出或检测出。
在鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌感染检测中，最常用的方法是快速全血平板凝集试验（图2）。 在鸡16周龄时，使用全血平板凝集试验对300羽鸡（每个鸡群采集300份全血样本）进行检测。
首次合格检测完成后，对该鸡群进行重复检测，方法是用全血平板凝集试验检测300羽鸡（每个鸡群采集300份全血样本）。
在接种沙门氏菌灭活苗或弱毒苗的鸡群中，留下300羽不予接种疫苗并做好标记，在16周龄对这些标记的鸡进行检测和鉴定，12个月后再次检测。
应按照NPIP指南确定鸡群沙门氏菌感染状况，具体如下：
●如果全血平板凝集试验结果为阴性，则该鸡群可认定为鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌阴性鸡群。
●如果全血平板凝集试验结果为阳性，则从鸡群中取25羽进行安乐死。从处死的每羽鸡中采集肠道和其他器官组织样本进行鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌培养，具体如下：
●肠道组织混合样本（与其他器官组织分开收集样本以避免交叉污染）：采集嗉囊壁、十二指肠、空肠、盲肠、盲肠扁桃体和直肠/泄殖腔的样本。将这些器官的样本混合在一起并作为一个单独的样本进行处理，但不要将不同鸡的样本混到一起。
○其他器官组织（与肠道组织分开收集样本以避免交叉污染）：采集肝脏、心脏、心包膜、脾脏、肺脏、肾脏、腹膜、胆囊、输卵管、畸形卵或睾丸以及发炎或未吸收的卵黄囊样本。将这些器官的样本混合在一起并作为一个单独样本进行处理，但不要将不同鸡的样本混在一起。
○对任何有明显异常的组织用拭子取样以进行细菌培养。
●如果该器官或肠道的细菌培养结果为阳性，那么该鸡群可认定为鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌阳性鸡群。
根据当地法规，确诊为鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌阳性的鸡群应处以安乐死。
2.3鸡毒支原体和滑液囊支原体
鸡毒支原体和滑液囊支原体都可以从种母鸡向雏鸡垂直传播，导致雏鸡质量较差，发生呼吸道疾病和滑膜炎，并且降低未来的生产力。加入NPIP的种鸡场必须净化鸡毒支原体和滑液囊支原体（图3）。
在鸡16周龄，用血清平板凝集试验或抗体酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked ImmunosorbentAssay，ELISA）对150羽鸡进行鸡毒支原体和滑液囊支原体检测（每个鸡群采集150份血清样本）。
在产蛋阶段，每隔90 d检测75羽鸡（75份血清样本）或每隔30 d检测25羽鸡（25份血清样本）。
应按照NPIP指南确定鸡群鸡毒支原体和滑液囊支原体感染状况：
●如果ELISA或血清平板凝集试验结果为阴性，那么该鸡群可认定为鸡毒支原体和滑液囊支原体阴性鸡群。
●如果ELISA或血清平板测试结果为阳性，那么必须至少对25份样本进行血凝抑制试验或对口咽拭子进行分子检测。如果血凝抑制试验结果的血清滴度为1：80或更高，那么该鸡群可确诊为阳性鸡群;如果血清滴度为1：40，则可认定为疑似病例，需在最终判断前进一步检测以便确诊。
在疾病流行的高风险地区，检测间隔应缩短至每2周进行一次以更快速地检测感染状况。
根据当地法规，确诊为阳性的鸡群应进行扑杀。
3 禽流感
在NPIP中增加了对低致病性禽流感（Low Pathogenic Avian Influenza， LPAI）監测的项目，一方面是为了增强对禽流感的监测工作，另一方面是为了补偿那些必须扑杀的H5或H7 LPAI阳性鸡群的生产者。监测低致病性H5/H7 LPAI感染能更容易地预防可以引发高致病性禽流感（Highly Pathogenic AvianInfluenza，HPAI）的病毒基因重组事件。在美国，仍然由美国农业部动物卫生检查局负责HPAI响应，并要求受感染鸡群得到可控的处置（图4）。
在鸡16周龄时，使用抗体ELISA或琼脂凝胶免疫扩散法（Agar Gel Immunodiffusion，AGID）对30羽鸡进行检测。
16周龄后，用AGID或ELISA法，每隔90 d对30羽鸡（30份血清样本）或每隔30 d对10羽鸡（10份血清样本）进行LPAI病毒检测。
应按照NPIP指南确定鸡群的禽流感状况：
●如果ELISA或AGID检测结果为阴性，则该鸡群可认定为禽流感阴性鸡群。
●如果ELISA或AGID检测结果为阳性，那么需要进行AGID或分子检测（PCR）。采集口咽拭子，每5个拭子放入3 mL（或者每11个拭子放入5 mL）合适的转移介质（脑心浸出物培养液）中。
●如果AGID或PCR检测结果为阳性，则应将血清样本和口咽/气管拭子送往样本来源国认可的国家实验室（在美国，应送至美国兽医服务实验室）进行验证和血清分型。
在疾病流行的高风险地区，应缩短检测间隔时间以便能快速检测感染状况。
根据当地法规，确诊为LPAI的鸡群应进行扑杀。
4 监测安排
表1给出了对种鸡群进行上述疾病监控的取样监测计划。
更严格的监测计划需要投入更多的资金，但可以更快地确定潜在的疾病威胁。
提高检测频率、扩大样本规模以及使用更敏感的筛选试验能够获得更快速的响应，并且可以降低疾病对生产连续性、客户信心以及公共关系的影响。
如果某种疾病在当地的流行率较高，采用更为密集的检测方案可能会更有利。