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摘要：为建立脾虚胀满合剂的质量标准，采用薄层色谱法对脾虚胀满合剂中枳壳、干姜和炙甘草进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定脾虚胀满合剂中柚皮苷、新橙皮苷、甘草苷、甘草酸的含量。建立的枳壳、干姜和炙甘草TLC鉴别方法中斑点清晰且阴性对照无干扰。柚皮苷、新橙皮苷、甘草苷、甘草酸线性范围分别为0.155 4～0.932 4μg、0.162 2～0.811 0μg、0.038 8～0.349 2μg、0.136 1～0.816 6μg，其平均回收率分别为103.99%（RSD=1.88%）、101.76%（RSD=1.25%）、94.84%（RSD=1.81%）、97.52%（RSD=4.02%）。该方法合理可行，重复性好，定性专属性强，定量准确度高，可用于脾虚胀满合剂的质量控制。
关键词：脾虚胀满合剂；质量标准；柚皮苷；甘草苷
文献标识码：A 文章编号：1674-5124（2016）11-0048-07
0 引言
近年来，功能性消化不良（functional dyspepsia，FD）已成为胃肠道疾病研究的热点，其发病率高，病因尚不十分明确，发病机制复杂，目前治疗上缺乏长期有效的治愈性药物和治疗方法，对患者的生活工作产生严重的影响。随着世界老龄化的到来，开发治疗老龄人功能性消化不良的药物迫在眉睫。
脾虚胀满合剂为临床经验方，由枳壳、生白术、干姜、槟榔、紫苏叶、炙甘草等多味中药组成，具有健脾行气，消痞除满之功效，用于脾虛气滞证见腹胀腹满、不欲饮食、大便不畅、苔白腻、脉沉细者。方中枳壳为君药，是中医临床上常用的理气药之一，其主要有效成分为黄酮类化合物、挥发油成分、生物碱类化合物等，具有调节胃肠运动等多种药理作用。
脾虚胀满合剂经验方在临床上应用治疗痞满脾虚气滞证近十年，临床效果良好。课题组已完成了脾虚胀满合剂的工艺研究，为了对临床用药提供参考，进一步保障患者用药安全，本文对其合剂质量标准进行了研究。
1 仪器与试药
P230Ⅱ型高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）；DZF-6050A型真空干燥箱（北京中兴伟业有限公司）；KQ-100E型超声波消洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FW100型高速万能粉碎机（北京科伟永兴仪器有限公司）；FA2004型分析电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）；CPA225D型分析电子天平（Sartorius）；PHS-3C型精密pH计（上海日岛科学仪器有限公司）
柚皮苷（批号110722-201312）、新橙皮苷（批号111857-201102）、甘草苷（批号111610-201106）、甘草酸铵（批号110731-201317）、6-姜辣素（批号111833-201303）对照品，枳壳（批号120981-201104）、干姜（批号120942-201309）、甘草（批号120904-201318）对照药材，均购自中国食品药品检定研究院；脾虚胀满合剂（批号20150810，20150826，20150913，自制）；甲醇、乙腈均为色谱纯；水为纯净水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 样品性状
脾虚胀满合剂样品为棕黄色澄清液体，气香。
2.2 薄层色谱
2.2.1 枳壳
取样品5 mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加10 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。另取枳壳对照药材1g，加甲醇10 mL，超声处理30 min，过滤，滤液作为对照药材溶液。另取柚皮苷对照品、新橙皮苷对照品，加甲醇制成每1 mL各含0.5 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》通则0502）试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各5μL，对照品溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（20：10：0.2，v：v：v）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热5 min，置紫外灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，呈相同颜色的荧光斑点，阴性样品无干扰，见图1。
2.2.2 干姜
取样品10 mL，加乙酸乙酯10 mL，振摇提取，分取乙酸乙酯液，浓缩至2 mL，作为供试品溶液。另取干姜对照药材1 g，加乙酸乙酯20 mL，超声处理10min，过滤，滤液作为对照药材溶液。再取6-姜辣素对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.5 mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》通则0502）试验，吸取上述3种溶液各15μL，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-三氯甲烷-乙酸乙酯（1：1：1，v：v：v）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，呈相同颜色的斑点，阴性样品无干扰，见图2。
2.2.3 炙甘草
取样品10 mL，加石油醚10 mL，振摇提取，弃去石油醚液层，水层加10 mL正丁醇萃取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5 mL溶解，作为供试品溶液。另取炙甘草对照药材1 g，加石油醚15 mL，超声处理30 min，过滤，药渣加正丁醇10 mL超声30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》通则0502）试验，吸取上述两种溶液各12μL，分别点样于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2，v：v：v：v）溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，呈相同颜色的斑点，阴性样品无干扰，见图3。 2.3 检查
2.3.1 相对密度
取洁净、干燥并精密称定质量的附温比重瓶，按相对密度测定法（《中国药典》通则0601），将蒸馏水煮沸冷却至15℃注满瓶中，装上温度计（瓶中无空气），浸入20℃的恒温水浴槽中，至比重瓶温度计达20℃稳定20～30 min，用滤纸吸去溢出侧管之水，盖上小罩，取出擦干，称得瓶（整套）和水总质量。另取3批脾虚胀满合剂各1份，同法操作，称得瓶与合剂总质量。测定结果见表1，3批脾虚胀满合剂平均相对密度为1.059 4，按照95%为最低限度，合剂相对密度应不低于1.006 4。
2.3.2 pH值
照pH测定法（《中国药典》通则0631）分别精密测定3批脾虚胀满合剂pH值（每批次平行2份，批号：20150810、20150826、20150913）。3批合剂pH值分别为3.48，3.46，3.68，平均pH值3.54，按照95%为最低限度，合剂pH应不低于3.36。
2.4 柚皮苷、新橙皮苷含量测定
2.4.1 色谱条件
Hypersil ODS-2色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流量1 mL/min，以乙腈-水（20：80，v：v）（用磷酸调节pH值至3）为流动相；检测波长为283nm。
2.4.2 供试品溶液的制备
精密吸取脾虚胀满合剂1 mL于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，制得供试品溶液。
2.4.3 對照品溶液的制备
取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含柚皮苷77.71μg的溶液，即得。
取新橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含新橙皮苷81.1μg的溶液，即得。
2.4.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例取干姜、紫苏叶、炙甘草、白术、槟榔粗粉适量，精密称定，置250 mL锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，加热回流1.5 h，冷却，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤。精密量取10 mL续滤液，加甲醇定容至25 mL，摇匀，微孔滤膜过滤，即可制得阴性对照溶液。
2.4.5 专属性试验
分别吸取2.4.2、2.4.3、2.4.4项下溶液各10μL，按照2.4.1项下色谱条件进样、测定，结果表明阴性样品无干扰，方法专属性强，见图4。
2.4.6 线性关系考察
分别精密吸取柚皮苷、新橙皮苷对照品各2，4，6，8，10 μL，按照2.4.1项下色谱条件进样，测定峰面积。以进样量X（μg）对峰面积y得柚皮苷线性关系方程为y=1 352.2X+6.995 5（r2=0.999 8），新橙皮苷线性关系方程为y=1 692.5X-24.652（r2=0.999 9）。结果表明，柚皮苷进样量0.155 4～0.932 4μg范围内与峰面积具有良好的线性关系，新橙皮苷进样量在0.162 2～0.811 0μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。
2.4.7 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液10μL，按照2.4.1项下色谱条件，连续进样6次，测定柚皮苷和新橙皮苷峰面积，以峰面积计算RSD值。得柚皮苷RSD=0.99%（n=6），新橙皮苷RSD=0.49%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.4.8 稳定性试验
精密吸取脾虚胀满合剂（批号20150913）1mL，按2.4.2制成供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10，12，18 h精密吸取供试品溶液10 μL，按照2.4.1项下色谱条件进样，测定峰面积，计算RSD值。得到柚皮苷RSD=0.85%，新橙皮苷RSD=0.81%，表明样品在18 h内稳定性良好。
2.4.9 重复性试验
精密量取同一批合剂样品（批号20150913），按2.4.2方法制成供试品溶液，平行6份，按照2.4.1项下色谱条件，各精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪，测定柚皮苷和新橙皮苷峰面积，以含量计算RSD值。得到柚皮苷RSD=0.46%（n=6），新橙皮苷RSD=0.79%（n=6），表明方法的重现性好。
2.4.10 中间精密度试验
由不同实验人员分别在不同日期，精密量取同一批合剂（批号20150913），按2.4.2项下的方法制成供试品溶液，平行6份，按照2.4.1项下色谱条件，各精密吸取10μL注入高效液相色谱仪，测定柚皮苷和新橙皮苷峰面积，以其含量计算RSD值。得到柚皮苷RSD=2.30%（n=12），新橙皮苷RSD=3.17%（n=12）。
2.4.11 加样回收率试验
精密吸取6份脾虚胀满合剂（批号20150913）1 mL，纯水稀释至25 mL，摇匀，再分别精密吸取稀释液1 mL，按低、中、高质量浓度精密加入柚皮苷对照品溶液和新橙皮苷对照品溶液适量，加水定容至10 mL，摇匀，微孔滤膜过滤，即为供试品溶液。分别精密吸取各供试品10μL，按照2.4.1项下色谱条件进样、测定。柚皮苷平均回收率103.99%，RSD=1.88%（n=6），新橙皮苷平均回收率101.76%，RSD=1.25%（n=6），结果见表2，表明该方法回收率良好。
2.4.12 样品含量测定
取3批脾虚胀满合剂（每批分别取样2份），按2.4.2制成供试品溶液，按照2.4.1项下色谱条件进样，测定柚皮苷、新橙皮苷峰面积，计算脾虚胀满合剂中柚皮苷、新橙皮苷的含量。得到3批脾虚胀满合剂中的柚皮苷质量浓度平均值为7.76 mg/mL，新橙皮苷质量浓度平均值为4.63 mg/mL。按照平均值的80%为最低限度，脾虚胀满合剂中柚皮苷质量浓度应不低于6.21 mg/mL，新橙皮苷应不低于3.70 mg/mL。结果见表3。 2.5 甘草苷、甘草酸含量测定
2.5.1 色谱条件
Hypersil ODS-2色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流量1 mL/min，以0.05%磷酸溶液（A）-乙腈（B）为流动相梯度洗脱：0～10 min，82%A；10～45 min，82%→50%A；45～46 min，50%→0%A；46～50 min，0%→82%A；检测波长为237 nm。
2.5.2 供试品溶液的制备
精密吸取脾虚胀满合剂0.5 mL于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，即可制得供试品溶液。
2.5.3 对照品溶液的制备
取甘草苷、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1 mL含甘草苷19.4μg、甘草酸铵0.138 9 mg（以甘草酸计0.136 1 mg）的混合对照品溶液。
取甘草苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1mL含甘草苷139.0μg的溶液，即得。
2.5.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例取干姜、枳壳、白术、紫苏叶、槟榔粗粉适量，精密称定，于具塞锥形瓶，加水100 mL，超声处理30 min，冷却，过滤，即得阴性对照溶液。
2.5.5 专属性试验
分别吸取2.5.2、2.5.3、2.5.4项下溶液各10μL，按照2.5.1项下色谱条件进样，测定，结果表明阴性样品无干扰，方法专属性强，见图5。
2.5.6 线性关系考察
分别精密吸取混合对照品2，6，10，14，18 μL（甘草苷），混合对照品1，2，3，4，5，6μL（甘草酸），按照2.5.1项下色谱条件进样，测定峰面积。以进样量X（μg）对峰面积y得到甘草苷线性关系式为Y=1795.5X+12.101（r2=0.999 3），甘草酸线性关系式为Y=477.76X+9.080 7（r2=0.999 9）。结果表明，甘草苷进样量在0.038 8～0.349 2μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，甘草酸铵（以甘草酸计）进样量在0.136 1～0.816 6μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5.7 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液10μL，按照2.5.1项下色谱条件，连续进样6次，测定甘草苷、甘草酸峰面积，以峰面积计算RSD值。得到甘草苷RSD=1.92%（n=6），甘草酸RSD=0.87%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.5.8 稳定性试验
精密吸取脾虚胀满合剂（批号20150826）0.5mL，按2.5.2制成供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，13 h精密吸取供试品溶液10μL，按照2.5.1项下色谱条件进样，测定峰面积。得到甘草苷RSD=1.37%，甘草酸RSD=1.67%，表明样品在13 h内稳定性良好。
2.5.9 重复性试验
精密量取同一批合剂样品（批号20150826），按2.5.2项下的方法制成供试品溶液，平行6份，按照2.5.1项下色谱条件，各精密吸取10μL注入高效液相色谱仪，测定甘草苷和甘草酸峰面积，以含量计算RSD值。得到甘草苷RSD=1.84%（n=6），甘草酸RSD=1.91%（n=6），表明该方法的重现性良好。
2.5.10 中间精密度试验
由不同实验人员分别在不同日期，精密量取同一批合剂（批号20150826），按2.5.2项下的方法制成供试品溶液，平行6份，按照2.5.1项下色谱条件，各精密吸取10μL注入高效液相色谱仪，测定甘草苷和甘草酸峰面积，以含量计算RSD值。得到甘草苷RSD=2.51%（n=12），甘草酸RSD=2.30%（n=12）。
2.5.11 加样回收率试验
精密吸取6份脾虚胀满合剂样品（批号20150826）0.6mL，分别按照中质量浓度精密加入甘草苷對照品溶液和甘草苷、甘草酸铵混合对照品溶液适量，按2.5.2制得供试品溶液。分别精密吸取各供试品10μL，按照2.5.1项下色谱条件进样，测定。甘草苷平均回收率为94.84%，RSD=1.81%（n=6），甘草酸平均回收率97.52%，RSD=4.02%（n=6），结果见表4。
2.5.12 样品测定
取3批脾虚胀满合剂（每批分别取样2份），按2.5.2制得供试品溶液。按照2.5.1项下色谱条件进样，测定甘草苷、甘草酸峰面积。得到3批脾虚胀满合剂中的甘草苷平均质量浓度为0.67 mg/mL，甘草酸平均质量浓度为0.66mg/mL。按平均值的80%为最低限度，脾虚胀满合剂中甘草苷质量浓度应不低于0.54 mg/mL，甘草酸不低于0.54 mg/mL。结果见表5。
3 结束语
脾虚胀满合剂是新研制的院内制剂，应用广泛，但其质量标准水平低下，无法控制产品质量，本文按照中药新药研究的有关技术指导原则，新建了脾虚胀满合剂的质量标准，能够进一步地控制该院内制剂的质量，保障患者的用药安全。
脾虚胀满合剂处方以枳壳为君药，主要有效部位为柚皮苷、新橙皮苷；槟榔为臣药，含生物碱0.3%～0.6%，以槟榔碱为主（0.1%～0.5%），具有健胃消食、行气利水的功效；炙甘草具有调和药性或矫臭矫味的作用。本文参考《中国药典》2015年版及文献资料，对脾虚胀满合剂样品处理方法、TLC展开条件及含量测定方法学进行考察，结合本处方特点对《中国药典》及文献中方法进行改善，建立方中枳壳、干姜、炙甘草的定性鉴别和柚皮苷、新橙皮苷、甘草苷、甘草酸含量测定项。
本文在预实验中曾对色谱条件进行优化，以期在同一条件下测定甘草苷、甘草酸、柚皮苷及新橙皮苷的含量，但通过研究后选择的较优条件下，柚皮苷、新橙皮苷的拖尾因子分别为1.09、3.07，均大于1.05，不满足洗脱要求。因此，我们在两种色谱条件下将这4种成分分别进行测定，柚皮苷、新橙皮苷的拖尾因子分别为0.99、0.97，符合标准。
参考已有文献资料，未得到合理可行的方法对处方中白术、槟榔等进行定性鉴别；槟榔碱因分离度不合格等原因未能对其进行测定。对除枳壳、炙甘草外的4味药材采用指纹图谱进行质量控制，但因药物成分复杂，分离度较差，不能满足相关要求，有待进一步研究。同时，3批成品含量有一定的差异，应在后续中试或大生产中继续积累数据，拟定更合理的含量限度。
（编辑：莫婕）
关键词：脾虚胀满合剂；质量标准；柚皮苷；甘草苷
文献标识码：A 文章编号：1674-5124（2016）11-0048-07
0 引言
近年来，功能性消化不良（functional dyspepsia，FD）已成为胃肠道疾病研究的热点，其发病率高，病因尚不十分明确，发病机制复杂，目前治疗上缺乏长期有效的治愈性药物和治疗方法，对患者的生活工作产生严重的影响。随着世界老龄化的到来，开发治疗老龄人功能性消化不良的药物迫在眉睫。
脾虚胀满合剂为临床经验方，由枳壳、生白术、干姜、槟榔、紫苏叶、炙甘草等多味中药组成，具有健脾行气，消痞除满之功效，用于脾虛气滞证见腹胀腹满、不欲饮食、大便不畅、苔白腻、脉沉细者。方中枳壳为君药，是中医临床上常用的理气药之一，其主要有效成分为黄酮类化合物、挥发油成分、生物碱类化合物等，具有调节胃肠运动等多种药理作用。
脾虚胀满合剂经验方在临床上应用治疗痞满脾虚气滞证近十年，临床效果良好。课题组已完成了脾虚胀满合剂的工艺研究，为了对临床用药提供参考，进一步保障患者用药安全，本文对其合剂质量标准进行了研究。
1 仪器与试药
P230Ⅱ型高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）；DZF-6050A型真空干燥箱（北京中兴伟业有限公司）；KQ-100E型超声波消洗器（昆山市超声仪器有限公司）；FW100型高速万能粉碎机（北京科伟永兴仪器有限公司）；FA2004型分析电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）；CPA225D型分析电子天平（Sartorius）；PHS-3C型精密pH计（上海日岛科学仪器有限公司）
柚皮苷（批号110722-201312）、新橙皮苷（批号111857-201102）、甘草苷（批号111610-201106）、甘草酸铵（批号110731-201317）、6-姜辣素（批号111833-201303）对照品，枳壳（批号120981-201104）、干姜（批号120942-201309）、甘草（批号120904-201318）对照药材，均购自中国食品药品检定研究院；脾虚胀满合剂（批号20150810，20150826，20150913，自制）；甲醇、乙腈均为色谱纯；水为纯净水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 样品性状
脾虚胀满合剂样品为棕黄色澄清液体，气香。
2.2 薄层色谱
2.2.1 枳壳
取样品5 mL，置蒸发皿中，蒸干，残渣加10 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。另取枳壳对照药材1g，加甲醇10 mL，超声处理30 min，过滤，滤液作为对照药材溶液。另取柚皮苷对照品、新橙皮苷对照品，加甲醇制成每1 mL各含0.5 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》通则0502）试验，吸取上述供试品溶液、对照药材溶液各5μL，对照品溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（20：10：0.2，v：v：v）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热5 min，置紫外灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，呈相同颜色的荧光斑点，阴性样品无干扰，见图1。
2.2.2 干姜
取样品10 mL，加乙酸乙酯10 mL，振摇提取，分取乙酸乙酯液，浓缩至2 mL，作为供试品溶液。另取干姜对照药材1 g，加乙酸乙酯20 mL，超声处理10min，过滤，滤液作为对照药材溶液。再取6-姜辣素对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.5 mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》通则0502）试验，吸取上述3种溶液各15μL，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-三氯甲烷-乙酸乙酯（1：1：1，v：v：v）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，呈相同颜色的斑点，阴性样品无干扰，见图2。
2.2.3 炙甘草
取样品10 mL，加石油醚10 mL，振摇提取，弃去石油醚液层，水层加10 mL正丁醇萃取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇5 mL溶解，作为供试品溶液。另取炙甘草对照药材1 g，加石油醚15 mL，超声处理30 min，过滤，药渣加正丁醇10 mL超声30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇5 mL溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》通则0502）试验，吸取上述两种溶液各12μL，分别点样于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2，v：v：v：v）溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，呈相同颜色的斑点，阴性样品无干扰，见图3。 2.3 检查
2.3.1 相对密度
取洁净、干燥并精密称定质量的附温比重瓶，按相对密度测定法（《中国药典》通则0601），将蒸馏水煮沸冷却至15℃注满瓶中，装上温度计（瓶中无空气），浸入20℃的恒温水浴槽中，至比重瓶温度计达20℃稳定20～30 min，用滤纸吸去溢出侧管之水，盖上小罩，取出擦干，称得瓶（整套）和水总质量。另取3批脾虚胀满合剂各1份，同法操作，称得瓶与合剂总质量。测定结果见表1，3批脾虚胀满合剂平均相对密度为1.059 4，按照95%为最低限度，合剂相对密度应不低于1.006 4。
2.3.2 pH值
照pH测定法（《中国药典》通则0631）分别精密测定3批脾虚胀满合剂pH值（每批次平行2份，批号：20150810、20150826、20150913）。3批合剂pH值分别为3.48，3.46，3.68，平均pH值3.54，按照95%为最低限度，合剂pH应不低于3.36。
2.4 柚皮苷、新橙皮苷含量测定
2.4.1 色谱条件
Hypersil ODS-2色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流量1 mL/min，以乙腈-水（20：80，v：v）（用磷酸调节pH值至3）为流动相；检测波长为283nm。
2.4.2 供试品溶液的制备
精密吸取脾虚胀满合剂1 mL于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，制得供试品溶液。
2.4.3 對照品溶液的制备
取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含柚皮苷77.71μg的溶液，即得。
取新橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含新橙皮苷81.1μg的溶液，即得。
2.4.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例取干姜、紫苏叶、炙甘草、白术、槟榔粗粉适量，精密称定，置250 mL锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，加热回流1.5 h，冷却，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤。精密量取10 mL续滤液，加甲醇定容至25 mL，摇匀，微孔滤膜过滤，即可制得阴性对照溶液。
2.4.5 专属性试验
分别吸取2.4.2、2.4.3、2.4.4项下溶液各10μL，按照2.4.1项下色谱条件进样、测定，结果表明阴性样品无干扰，方法专属性强，见图4。
2.4.6 线性关系考察
分别精密吸取柚皮苷、新橙皮苷对照品各2，4，6，8，10 μL，按照2.4.1项下色谱条件进样，测定峰面积。以进样量X（μg）对峰面积y得柚皮苷线性关系方程为y=1 352.2X+6.995 5（r2=0.999 8），新橙皮苷线性关系方程为y=1 692.5X-24.652（r2=0.999 9）。结果表明，柚皮苷进样量0.155 4～0.932 4μg范围内与峰面积具有良好的线性关系，新橙皮苷进样量在0.162 2～0.811 0μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。
2.4.7 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液10μL，按照2.4.1项下色谱条件，连续进样6次，测定柚皮苷和新橙皮苷峰面积，以峰面积计算RSD值。得柚皮苷RSD=0.99%（n=6），新橙皮苷RSD=0.49%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.4.8 稳定性试验
精密吸取脾虚胀满合剂（批号20150913）1mL，按2.4.2制成供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10，12，18 h精密吸取供试品溶液10 μL，按照2.4.1项下色谱条件进样，测定峰面积，计算RSD值。得到柚皮苷RSD=0.85%，新橙皮苷RSD=0.81%，表明样品在18 h内稳定性良好。
2.4.9 重复性试验
精密量取同一批合剂样品（批号20150913），按2.4.2方法制成供试品溶液，平行6份，按照2.4.1项下色谱条件，各精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪，测定柚皮苷和新橙皮苷峰面积，以含量计算RSD值。得到柚皮苷RSD=0.46%（n=6），新橙皮苷RSD=0.79%（n=6），表明方法的重现性好。
2.4.10 中间精密度试验
由不同实验人员分别在不同日期，精密量取同一批合剂（批号20150913），按2.4.2项下的方法制成供试品溶液，平行6份，按照2.4.1项下色谱条件，各精密吸取10μL注入高效液相色谱仪，测定柚皮苷和新橙皮苷峰面积，以其含量计算RSD值。得到柚皮苷RSD=2.30%（n=12），新橙皮苷RSD=3.17%（n=12）。
2.4.11 加样回收率试验
精密吸取6份脾虚胀满合剂（批号20150913）1 mL，纯水稀释至25 mL，摇匀，再分别精密吸取稀释液1 mL，按低、中、高质量浓度精密加入柚皮苷对照品溶液和新橙皮苷对照品溶液适量，加水定容至10 mL，摇匀，微孔滤膜过滤，即为供试品溶液。分别精密吸取各供试品10μL，按照2.4.1项下色谱条件进样、测定。柚皮苷平均回收率103.99%，RSD=1.88%（n=6），新橙皮苷平均回收率101.76%，RSD=1.25%（n=6），结果见表2，表明该方法回收率良好。
2.4.12 样品含量测定
取3批脾虚胀满合剂（每批分别取样2份），按2.4.2制成供试品溶液，按照2.4.1项下色谱条件进样，测定柚皮苷、新橙皮苷峰面积，计算脾虚胀满合剂中柚皮苷、新橙皮苷的含量。得到3批脾虚胀满合剂中的柚皮苷质量浓度平均值为7.76 mg/mL，新橙皮苷质量浓度平均值为4.63 mg/mL。按照平均值的80%为最低限度，脾虚胀满合剂中柚皮苷质量浓度应不低于6.21 mg/mL，新橙皮苷应不低于3.70 mg/mL。结果见表3。 2.5 甘草苷、甘草酸含量测定
2.5.1 色谱条件
Hypersil ODS-2色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流量1 mL/min，以0.05%磷酸溶液（A）-乙腈（B）为流动相梯度洗脱：0～10 min，82%A；10～45 min，82%→50%A；45～46 min，50%→0%A；46～50 min，0%→82%A；检测波长为237 nm。
2.5.2 供试品溶液的制备
精密吸取脾虚胀满合剂0.5 mL于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，即可制得供试品溶液。
2.5.3 对照品溶液的制备
取甘草苷、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1 mL含甘草苷19.4μg、甘草酸铵0.138 9 mg（以甘草酸计0.136 1 mg）的混合对照品溶液。
取甘草苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1mL含甘草苷139.0μg的溶液，即得。
2.5.4 阴性对照溶液的制备
按处方比例取干姜、枳壳、白术、紫苏叶、槟榔粗粉适量，精密称定，于具塞锥形瓶，加水100 mL，超声处理30 min，冷却，过滤，即得阴性对照溶液。
2.5.5 专属性试验
分别吸取2.5.2、2.5.3、2.5.4项下溶液各10μL，按照2.5.1项下色谱条件进样，测定，结果表明阴性样品无干扰，方法专属性强，见图5。
2.5.6 线性关系考察
分别精密吸取混合对照品2，6，10，14，18 μL（甘草苷），混合对照品1，2，3，4，5，6μL（甘草酸），按照2.5.1项下色谱条件进样，测定峰面积。以进样量X（μg）对峰面积y得到甘草苷线性关系式为Y=1795.5X+12.101（r2=0.999 3），甘草酸线性关系式为Y=477.76X+9.080 7（r2=0.999 9）。结果表明，甘草苷进样量在0.038 8～0.349 2μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，甘草酸铵（以甘草酸计）进样量在0.136 1～0.816 6μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5.7 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液10μL，按照2.5.1项下色谱条件，连续进样6次，测定甘草苷、甘草酸峰面积，以峰面积计算RSD值。得到甘草苷RSD=1.92%（n=6），甘草酸RSD=0.87%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.5.8 稳定性试验
精密吸取脾虚胀满合剂（批号20150826）0.5mL，按2.5.2制成供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，13 h精密吸取供试品溶液10μL，按照2.5.1项下色谱条件进样，测定峰面积。得到甘草苷RSD=1.37%，甘草酸RSD=1.67%，表明样品在13 h内稳定性良好。
2.5.9 重复性试验
精密量取同一批合剂样品（批号20150826），按2.5.2项下的方法制成供试品溶液，平行6份，按照2.5.1项下色谱条件，各精密吸取10μL注入高效液相色谱仪，测定甘草苷和甘草酸峰面积，以含量计算RSD值。得到甘草苷RSD=1.84%（n=6），甘草酸RSD=1.91%（n=6），表明该方法的重现性良好。
2.5.10 中间精密度试验
由不同实验人员分别在不同日期，精密量取同一批合剂（批号20150826），按2.5.2项下的方法制成供试品溶液，平行6份，按照2.5.1项下色谱条件，各精密吸取10μL注入高效液相色谱仪，测定甘草苷和甘草酸峰面积，以含量计算RSD值。得到甘草苷RSD=2.51%（n=12），甘草酸RSD=2.30%（n=12）。
2.5.11 加样回收率试验
精密吸取6份脾虚胀满合剂样品（批号20150826）0.6mL，分别按照中质量浓度精密加入甘草苷對照品溶液和甘草苷、甘草酸铵混合对照品溶液适量，按2.5.2制得供试品溶液。分别精密吸取各供试品10μL，按照2.5.1项下色谱条件进样，测定。甘草苷平均回收率为94.84%，RSD=1.81%（n=6），甘草酸平均回收率97.52%，RSD=4.02%（n=6），结果见表4。
2.5.12 样品测定
取3批脾虚胀满合剂（每批分别取样2份），按2.5.2制得供试品溶液。按照2.5.1项下色谱条件进样，测定甘草苷、甘草酸峰面积。得到3批脾虚胀满合剂中的甘草苷平均质量浓度为0.67 mg/mL，甘草酸平均质量浓度为0.66mg/mL。按平均值的80%为最低限度，脾虚胀满合剂中甘草苷质量浓度应不低于0.54 mg/mL，甘草酸不低于0.54 mg/mL。结果见表5。
3 结束语
脾虚胀满合剂是新研制的院内制剂，应用广泛，但其质量标准水平低下，无法控制产品质量，本文按照中药新药研究的有关技术指导原则，新建了脾虚胀满合剂的质量标准，能够进一步地控制该院内制剂的质量，保障患者的用药安全。
脾虚胀满合剂处方以枳壳为君药，主要有效部位为柚皮苷、新橙皮苷；槟榔为臣药，含生物碱0.3%～0.6%，以槟榔碱为主（0.1%～0.5%），具有健胃消食、行气利水的功效；炙甘草具有调和药性或矫臭矫味的作用。本文参考《中国药典》2015年版及文献资料，对脾虚胀满合剂样品处理方法、TLC展开条件及含量测定方法学进行考察，结合本处方特点对《中国药典》及文献中方法进行改善，建立方中枳壳、干姜、炙甘草的定性鉴别和柚皮苷、新橙皮苷、甘草苷、甘草酸含量测定项。
本文在预实验中曾对色谱条件进行优化，以期在同一条件下测定甘草苷、甘草酸、柚皮苷及新橙皮苷的含量，但通过研究后选择的较优条件下，柚皮苷、新橙皮苷的拖尾因子分别为1.09、3.07，均大于1.05，不满足洗脱要求。因此，我们在两种色谱条件下将这4种成分分别进行测定，柚皮苷、新橙皮苷的拖尾因子分别为0.99、0.97，符合标准。
参考已有文献资料，未得到合理可行的方法对处方中白术、槟榔等进行定性鉴别；槟榔碱因分离度不合格等原因未能对其进行测定。对除枳壳、炙甘草外的4味药材采用指纹图谱进行质量控制，但因药物成分复杂，分离度较差，不能满足相关要求，有待进一步研究。同时，3批成品含量有一定的差异，应在后续中试或大生产中继续积累数据，拟定更合理的含量限度。
（编辑：莫婕）