雷帕霉素抑制猴视网膜微血管内皮细胞增生的实验研究

来源 :中华实验眼科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chinetman
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背景 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在细胞周期调控机制中扮演着重要角色,其抑制剂雷帕霉素(RAPA)可通过调控细胞周期抑制细胞增生. 目的 观察RAPA对体外培养的猴视网膜微血管内皮细胞RF/6A细胞系增生的影响. 方法 体外培养RF/6A细胞系,分别在培养液中加入PBS、10 μg/L RAPA和5μg/L RAPA.采用Western blot法检测cyclin D1蛋白在各组RF/6A细胞中的表达;采用流式细胞仪检测不同质量浓度RAPA作用后G0/G1期RF/6A细胞的比例;行血管内皮细胞体外成管实验观察不同质量浓度RAPA对RF/6A细胞成管的抑制作用. 结果 Western blot检测表明,PBS组、10μg/LRAPA组和5μg/L RAPA组RF/6A细胞中cyclin D1蛋白的相对表达量分别为0.92±0.04、0.58±0.02和0.73±0.02,3个组间的差异有统计学意义(F=246.320,P=0.000),其中10 μg/L RAPA组和5μg/L RAPA组cyclin D1蛋白在RF/6A细胞中的相对表达量均明显低于PBS组,差异均有统计学意义(P<0.05).细胞周期检测发现,PBS组、10 μg/L RAPA组和5μg/L RAPA组G0/G1期细胞比例分别为(42.13±0.57)%、(65.15±0.64)%和(54.09±0.78)%,3个组间差异有统计学意义(F=887.815,P=0.000),其中10 μg/L RAPA组和5 μg/L RAPA组RF/6A细胞G0/G1期比例明显高于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05).体外成管实验显示,PBS组、10 μg/L RAPA组及5μg/L RAPA组每个视野下血管内皮细胞成管数分别为(9.67±1.53)、(4.33±0.58)和(6.33±0.58)个/视野,3个组间比较差异有统计学意义(F=21.778,P=0.002),10 μg/LRAPA组内皮细胞管数最少,其次为5μg/L RAPA组,均明显少于PBS组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 RAPA可通过下调cyclin D1蛋白的表达抑制RF/6A细胞的增生,较高质量浓度的RAPA作用更强。

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