【摘 要】
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目的构建结核分枝杆菌去乙酰化酶2（Sir2）原核表达载体,并进行表达纯化及酶学研究。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,聚合酶链反应扩增Sir2基因,构建pET-28a-Sir2重组质
【机 构】
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中国人民解放军第一七五医院,厦门大学附属东南医院检验科
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目的构建结核分枝杆菌去乙酰化酶2（Sir2）原核表达载体,并进行表达纯化及酶学研究。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,聚合酶链反应扩增Sir2基因,构建pET-28a-Sir2重组质粒,在E.coli BL2（DE3）中诱导表达蛋白,经Ni 2＋-NTA柱纯化,最后通过去乙酰化酶试验测定Sir2酶活的最适反应温度和pH值,以及吡嗪酰胺对其酶活的影响。结果成功构建了Sirt2原核表达载体,并能在E.coli BL21（DE3）中高效表达。随后对纯化的Sir2蛋白进行依赖于NAD＋的去乙酰化活性
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