【摘 要】
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目的:提高重组抗菌蛋白BPI23在E.coli DH 5α中的表达水平及提纯后蛋白的复性率.方法:通过降低目的基因5′端序列中GC含量和构建双拷贝重组表达载体pBV220-(synBPI600)2,减少
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目的:提高重组抗菌蛋白BPI23在E.coli DH 5α中的表达水平及提纯后蛋白的复性率.方法:通过降低目的基因5′端序列中GC含量和构建双拷贝重组表达载体pBV220-(synBPI600)2,减少低频密码子数目和增加目的基因拷贝数,并采用不同复性方法对提纯后的蛋白进行复性.结果:降低目的基因5′端序列中GC含量后,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的14.3%;单双拷贝重组表达载体转化E.coli DH 5α后,目的蛋白的表达水平无明显差异;在复性液中加入PEG4000后,目的蛋白产生聚集沉淀较少.结论:减少目的基因中GC含量可显著提高BPI23的表达水平,增加表达载体中目的基因的拷贝数对其表达水平无影响,在蛋白复性液中加入PEG4000可明显抑制蛋白聚集沉淀.
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