型特异性荧光定量RT-PCR和基因进化分析在呼吸道合胞病毒感染诊断中的应用

来源 :中华儿科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:crowboy2000
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呼吸道合胞病毒(RSV)是引起冬春季婴幼儿下呼吸道感染最重要、最常见的病原体之一,在婴幼儿中易引起大规模的暴发流行。2005年底浙江省某地妇儿医院报告婴幼儿肺炎病例骤增,2005年12月-2006年1月间我们对当地医院采集的24例急性期患者的鼻咽吸引物标本进行型特异性 RSV 荧光定量 RT-PCR、免疫荧光法快速检测,并进行病毒分离和主要抗原基因的进化分析。材料和方法1.标本采集:由当地医院采集此次暴发疫情中的急性期住院患儿鼻咽吸引物标本24份,带冰运送至本实验室后-80℃保存。2.引物和 TaqMan 探针设计:用 Primer Express2.0软件设计型特异性引物和 TaqMan 探针,引物序列: Respiratory syncytial virus (RSV) is one of the most important and common pathogens causing lower respiratory infection in infants and young children in winter and spring. It is easy to cause large-scale outbreak in infants. At the end of 2005, Zhejiang Women’s and Children’s Hospital reported a surge of infant pneumonia cases. From December 2005 to January 2006, we detected type-specific RSV fluorescence in nasopharyngeal aspirates of 24 acute patients collected from local hospitals Quantitative RT-PCR, rapid immunofluorescence assay, and virus isolation and analysis of the evolution of the major antigen genes. MATERIALS AND METHODS 1. Specimen collection: 24 samples of acute nasopharyngeal aspirated samples of the outbreak in this outbreak were collected by local hospitals and transported to our laboratory with ice for storage at -80 ℃. 2. Primer and TaqMan probe design: Using Primer Express2.0 software design-specific primers and TaqMan probe, the primer sequence:
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