观察转录因子特异性蛋白1(SP1)对三阴乳腺癌细胞株HCC1806增殖凋亡以及β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。
方法人正常乳腺上皮细胞株MCF10A和三阴乳腺癌细胞株HCC1806购自中国科学院上海细胞所，通过定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot分析MCF10A和HCC1806细胞中SP1的表达水平，采用Lipofectamine 2000瞬转技术对HCC1806细胞转染SP1小干扰RNA(siRNA)(实验组)和无义siRNA(对照组)，通过噻唑蓝(MTT)实验检测SP1对细胞增殖的影响，流式细胞术检测SP1对细胞凋亡的影响，Western blot法检测SP1对细胞β-catenin信号通路相关蛋白[β-catenin、糖原合成酶激酶3β(Gsk3β)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p53和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3]表达水平的影响。应用SPSS 19.0统计软件进行分析。
结果SP1在三阴乳腺癌细胞株HCC1806中的表达水平(3.09±0.26)明显高于正常乳腺上皮细胞株MCF10A(1.06±0.09，t＝0.008，P<0.01)。HCC1806细胞转染SP1 siRNA后，实验组SP1 mRNA相对表达量为(0.37±0.10)，SP1 mRNA表达量较对照组下降(66.90±3.79)%，差异有统计学意义(t＝0.002，P<0.05)。转染SP1 siRNA后HCC1806细胞实验组增殖率为(40.82±2.67)%，明显低于对照组[(72.72±5.90)%，t＝0.000，P<0.05]，降低了(43.39±7.65)%，实验组凋亡率为(42.14±4.54)%，显著高于对照组[(22.25±3.07)%，t＝0.002，P<0.05]，升高了(19.89±5.52)%。实验组β-catenin和Cyclin D1蛋白表达量分别为(0.21±0.08)、(0.70±0.04)，对照组β-catenin和Cyclin D1蛋白表达量分别为(0.61±0.09)、(0.92±0.03)，实验组β-catenin和Cyclin D1蛋白表达量显著降低(t＝0.002、0.001，P<0.05)，实验组β-catenin和Cyclin D1蛋白表达量降低分别为(65.80±7.76)%和(23.88±4.99)%，实验组Gsk3β、p53和Caspase-3蛋白表达量分别为(0.73±0.05)、(0.74±0.05)和(0.62±0.11)，对照组Gsk3β、p53和Caspase-3蛋白表达量分别为(0.48±0.03)、(0.25±0.03)和(0.36±0.05)，实验组Gsk3β、p53和Caspase-3蛋白表达量显著升高(t＝0.001、0.001、0.010，P<0.05)，实验组Gsk3β、p53和Caspase-3蛋白表达量升高分别为(52.79±11.29)%、(202.60±39.41)%和(77.12±35.20)%。
结论SP1在三阴乳腺癌细胞株HCC1806中高表达，SP1表达下调可通过β-catenin信号通路有效抑制HCC1806细胞生长并促进其凋亡。