【摘 要】
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参照已发表的主要表面蛋白5(MSP5)基因的核苷酸序列,设计了一对特异性引物,以边缘无浆体基因组DNA为模版,采用PCR技术扩增获得了MSP5基因;将其克隆到pGEM-T Easy载体,并进行
【机 构】
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中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃兰州,730046
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参照已发表的主要表面蛋白5(MSP5)基因的核苷酸序列,设计了一对特异性引物,以边缘无浆体基因组DNA为模版,采用PCR技术扩增获得了MSP5基因;将其克隆到pGEM-T Easy载体,并进行测序分析,结果表明,克隆的MSP5基因与GenBank上登录的Florida株MSP5基因的序列同源性达98.6%,编码氨基酸的同源性为99%,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为633 bp.将该基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组原核表达载体.将其转化到DH5á宿主菌中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达,表达产物的分子质量为45 ku.Western blot分析表明,此表达产物能够被抗边缘无浆体阳性血清所识别.通过裂解、洗涤、变性、复性等方法对包涵体蛋白进行处理,获得的纯化产物浓度为1 mg/mL.
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