【摘 要】
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目的:构建含人IL-10全基因序列的原核表达载体, 并进行表达及产物活性的鉴定.方法:利用RT-PCR方法, 从人肝癌细胞系HepG2的总RNA中扩增IL-10的全长编码序列.编码序列经测序验
【机 构】
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解放军第302医院传染病研究所免疫室
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目的:构建含人IL-10全基因序列的原核表达载体, 并进行表达及产物活性的鉴定.方法:利用RT-PCR方法, 从人肝癌细胞系HepG2的总RNA中扩增IL-10的全长编码序列.编码序列经测序验证后, 将其克隆入表达载体PET-28 a(+), 构建IL-10基因的重组原核表达载体.在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白, 表达产物采用Western blot和ELISA进行鉴定.结果:表达产物主要位于包涵体内.经Western blot分析和ELISA检测显示, 表达产物的相对分子质量(Mr)同预期的结果相符, 有结合抗体活性.结论:成功地扩增人IL-10全基因序列, 并构建了含该基因序列的原核表达载体, 在大肠杆菌中高效表达的表达产物具有抗原活性, 为下一步制备抗IL-10的单克隆抗体(mAb)提供了必要的前提.
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