【摘 要】
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目的 为了探讨 β1 ,4半乳糖基转移酶 Ⅱ和Ⅴ (β1 ,4 galactosyltransferaseI,β 1 ,4 GalT ⅡandⅤ )表达定位 ,本实验通过分子生物学手段 ,制备正、反义 β 1 ,4 Gal
【机 构】
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南通医学院江苏省神经再生重点实验室,复旦大学上海医学院基因研究中心
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目的 为了探讨 β1 ,4半乳糖基转移酶 Ⅱ和Ⅴ (β1 ,4 galactosyltransferaseI,β 1 ,4 GalT ⅡandⅤ )表达定位 ,本实验通过分子生物学手段 ,制备正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针。 方法 设计引物 ,提取小鼠脑总RNA ,通过RT PCR方法 ,得到 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ基因序列 ,将其克隆到pGEM T载体。根据其多克隆酶切位点和Sp6及T7位置 ,分别酶切后作为转录模板 ,通过Sp6及T7RNA聚合酶 ,得到正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后 ,最后通过原位杂交分析标记探针的特异性和杂交效果。结果 本实验得到了高效价的正、反义 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ地高辛标记的RNA原位杂交探针 ,并表现出很好的杂交效果。结论 正、反义β 1 ,4 GalT Ⅱ和ⅤRNA原位杂交探针的制备 ,为进一步研究 β 1 ,4 GalT Ⅱ和Ⅴ在组织中的表达 ,尤其在神经组织的定位奠定基础
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