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目的
利用RNAi技术沉默肥胖者内脏脂肪组织中叉头状转录因子O1(FOXO1)基因后检测葡萄糖转运体4(GLUT4)的mRNA和蛋白表达,探讨肥胖者FOXO1与胰岛素抵抗的关系及机制。
方法构建转录因子FOXO1特异性siRNA载体pSIREN-DNR-DsRed-siFOXO1(FOXO1-siRNA)质粒并鉴定;选取5例肥胖者大网膜脂肪组织利用脂质体为媒介转染FOXO1-siRNA质粒;半定量RT-PCR检测FOXO1 mRNA表达,测定抑制效率;半定量RT-PCR检测GLUT4 mRNA表达量,Western blot检测GLUT4蛋白表达量。采用t检验进行统计分析。
结果成功构建FOXO1-siRNA质粒,转染此质粒的脂肪组织细胞FOXO1 mRNA表达水平与对照组相比下降约49%(P<0.05),说明转染成功;FOXO1-siRNA质粒转染组GLUT4 mRNA较对照组增加约1.33倍(P=0.001),FOXO1-siRNA质粒转染组GLUT4蛋白较对照组增加约1.25倍(P<0.05)。
结论抑制肥胖者网膜内脏脂肪组织FOXO1基因的表达可引起GLUT4 mRNA及蛋白表达增加。