大鼠脑组织NT-3融合蛋白的表达、纯化及抗体制备

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目的 克隆大鼠脑组织神经营养素3(NT-3)基因,原核诱导表达并纯化,制备高效价抗体,为研究其对周围神经损伤修复的影响提供实验基础。方法 用RT-PCR法扩增目的基因,依次克隆入pMD-18T载体及亚克隆入pRSET-A原核表达载体。导人大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定后用镍柱纯化。免疫家兔制备特异性抗体。结果 RT-PCR得到777bp的片断,酶切鉴定及测序证实与GeneBank中大鼠NT-3序列一致,成功构建了原核表达载体pRSET-A—NT-3。导入BL21诱导得到一条约
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