【摘 要】
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目的:在大肠杆菌BL-21(DE3)PlysS中表达中华绒螯蟹金属硫蛋白基因多拷贝串联重组基因.方法:将中华绒螯蟹金属硫蛋白(MT)基因通过PCR方法引入适当的限制性内切酶位点,通过T-A
【机 构】
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广州医学院,实验医学研究中心,广东,广州,510182
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目的:在大肠杆菌BL-21(DE3)PlysS中表达中华绒螯蟹金属硫蛋白基因多拷贝串联重组基因.方法:将中华绒螯蟹金属硫蛋白(MT)基因通过PCR方法引入适当的限制性内切酶位点,通过T-A克隆,双酶切得到两端含内切酶位点的各单拷贝片段,再逐一利用引入住点插入到pET-15b原核表达载体中,载体转化大肠杆菌BL-21(DE3)PlysS,经过酶切和测序鉴定验证,得到含重组质粒的工程菌.结果:成功构建了与His标签融合表达的含2拷贝和3拷贝中华绒螯蟹金属硫蛋白基因的重组质粒.摸索了不同的pH、IPTG、温度条件、锌离子浓度、菌体OD值、诱导时间后,选择最佳条件,成功高效地表达了与His融合的2拷贝和3拷贝的金属硫蛋白,目标蛋白表达量分别占菌体总蛋白的40%和45%.结论:成功制备了金属硫蛋白的工程菌并获得高效表达目标蛋白,为金属硫蛋白的科学研究和工业化大规模生产应用打下了坚实的基础.
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