【摘 要】
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目的观测小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)诱导的胰岛素分泌细胞(IPCs)在大鼠胰腺脱细胞支架上的生长及功能发挥。方法经脾动脉持续灌注洗脱剂制备胰腺脱细胞支架，对其进行组织染色，DNA、糖胺多糖(GAG)含量，生物相容性检测。含小鼠肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)、胰腺十二指肠同源异型盒-1(PDX-1)和神经源性分化因子-1(NeuroD1)的腺病毒联合导入mBMSCs，免疫荧光、实时
【机 构】
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215006 苏州大学附属第一医院普通外科,226000 南通市肿瘤医院普通外科,226001 南通大学附属医院普通外科,226001 南通大学附属医院普通外科,226001 南通大学附属医院普通外科
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目的观测小鼠骨髓间充质干细胞(mBMSCs)诱导的胰岛素分泌细胞(IPCs)在大鼠胰腺脱细胞支架上的生长及功能发挥。
方法经脾动脉持续灌注洗脱剂制备胰腺脱细胞支架，对其进行组织染色，DNA、糖胺多糖(GAG)含量，生物相容性检测。含小鼠肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)、胰腺十二指肠同源异型盒-1(PDX-1)和神经源性分化因子-1(NeuroD1)的腺病毒联合导入mBMSCs，免疫荧光、实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测胰岛素(Insulin)表达；酶联免疫吸附测定(ELISA)检测不同浓度葡萄糖刺激后胰岛素分泌情况。IPCs再种植于脱细胞支架内，培养后行苏木素-伊红(HE)染色、免疫荧光、FQ-PCR检测细胞生长及功能发挥。
结果经灌注后未见细胞残留，可见细胞外基质(ECM)保留，DNA定量提示细胞含量为(44.92±3.89) ng/mg(t＝15.160，P＝0.001)，GAG含量为(30.27±2.70) ng/mg，(t＝2.862，P＝0.046)，免疫组织化学显示胶原Ⅰ、纤连蛋白保留。三基因修饰的mBMSCs Insulin表达阳性，葡萄糖刺激试验显示其对不同浓度葡萄糖有反应。将IPCs在胰腺脱细胞支架内循环灌注培养，HE染色显示细胞在支架内生长良好，免疫荧光和FQ-PCR显示Insulin表达阳性，与二维培养比较，Insulin表达提高(t＝15.030，P＝0.004)。
结论制备的大鼠胰腺脱细胞支架保存了基本的脉管结构及ECM，生物相容性良好。PDX-1、NeuroD1和MafA协同促进mBMSCs分化并获得Insulin合成和分泌能力。经三维循环灌注培养，IPCs能够在支架内生长及发挥功能，且细胞功能得到促进。
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