【摘 要】
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为建立快速检测血清4型禽腺病毒病（Fowl aviadenovirus serotype 4,FAdV-4）的基于TaqMan探针的Quantitative real-time PCR（qPCR）检测方法，本研究根据Hexon基因序列，设计相关的qPCR特异性引物和探针，经特异性、敏感性和重复性试验以及反应程序等系列优化后，最终建立荧光定量检测方法并应用于临床样品的病原检测。FAdV-4的qPCR
【基金项目】
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江苏高校“青蓝工程”项目[苏教师函（2020）10号]； 江苏省高等学校自然科学研究重大项目（21KJA230001）； 江苏省2019年度高校优秀科技创新团队项目；
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为建立快速检测血清4型禽腺病毒病（Fowl aviadenovirus serotype 4,FAdV-4）的基于TaqMan探针的Quantitative real-time PCR（qPCR）检测方法，本研究根据Hexon基因序列，设计相关的qPCR特异性引物和探针，经特异性、敏感性和重复性试验以及反应程序等系列优化后，最终建立荧光定量检测方法并应用于临床样品的病原检测。FAdV-4的qPCR结果表明，优化后标准曲线决定系数（R~2）为0.998,扩增效率（E）为95.226%,该方法效果良好。利用该方法，除FAdV-4外其他禽类常见病原均未检测到，该方法具有良好的特异性。该qPCR方法检出阳性的最低拷贝数为100个拷贝，而普通PCR方法检出阳性的最低拷贝数为10 000个拷贝，说明其具有良好的灵敏度。组内和组间变异系数均≤0.22%,该方法的重复性较高。对180份从江苏、安徽、江西和广西等省份采集的临床疑似样品进行检测，结果显示，qPCR方法检出率为51.1%,而普通PCR方法检出率为32.8%;同时基于qPCR引物的检出符合率为100.00%,而基于普通PCR特异性引物检出的符合率为82.35%,表明该qPCR方法针对临床疑似样品的检测准确性更高。该方法的建立有助于推动禽腺病毒病的分子流行病学研究和防控。
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