观察肺腺癌组织中微小RNA(miRNA,miR)-145基因启动子区域各个胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤基序(CpG)岛的甲基化情况,探讨DNA甲基化在肺腺癌中调控miR-145表达的分子机制。
方法用DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-aza-C)对肺腺癌细胞株A549、H1975进行处理,比较miR-145的表达变化。收集手术切除的肺腺癌及癌旁组织标本共20对,应用甲基化DNA定量分析平台和半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对癌和癌旁组织miR-145启动子区域的甲基化水平进行定量分析。
结果经5-aza-C处理后,A549和H1975细胞株中的miR-145表达均明显上调。甲基化定量数据显示在肺腺癌组织miR-145基因启动子区域的甲基化率均值明显高于癌旁组织(0.59比0.32,P< 0.01)。并且在肺腺癌组织中,miR-145基因启动子区域的所有13个CpG位点均呈显著高甲基化:CpG1:13.55±2.06比19.30±5.83;CpG2:27.65±5.68 比42.85±15.64;Cp G3:36.40±6.28比60.20±17.55;Cp G4:28.40±6.45比42.25±16.78; CpG5、6:28.65±3.91比41.50±10.19;CpG7:14.40±3.14比27.75±11.69;CpG8、9、10:55.50± 4.85比76.50±8.52;Cp G11:48.10±3.51比64.20±6.26;Cp G12:52.75±5.90比73.35±12.70; CpG13:45.80±4.71比58.70±15.40。
结论肺腺癌细胞内miR-145表达受其基因启动子区甲基化调控;肺腺癌组织内miR-145基因启动子区Cp G岛高甲基化与该基因表达水平变化密切相关。