背景:已有研究采用3D打印人工皮肤,但存在皮肤表皮层不能分化为多层等缺陷。目的:优化人工皮肤的构建方法,获得更好的人工皮肤。方法:从牛尾和鼠尾中分别提取与纯化胶原。从儿童包皮组织中分离培养原代成纤维细胞和角质细胞,再以牛尾(或鼠尾)胶原包埋成纤维细胞,构建真皮层;将角质细胞接种于含鼠尾(或牛尾)胶原包埋的成纤维细胞上培养7 d,再气提培养7 d,获得人工皮肤。观察人工皮肤的收缩性、水接触角,并进行苏木精-伊红染色、天狼猩红染色及免疫荧光染色。结果与结论:(1)鼠尾胶原构建人工皮肤真皮层面积下降了50%,牛尾胶原构建人工皮肤真皮层面积只下降了21%;(2)牛尾胶原构建人工皮肤的接触角与人皮肤接近,比鼠尾胶原构建人工皮肤的疏水性更好;(3)天狼猩红染色结果显示,与鼠尾胶原构建的人工皮肤相比,牛尾胶原构建人工皮肤的胶原折光性更强,胶原排列更有序,纤维更粗;(4)苏木精-伊红染色显示,与鼠尾胶原构建人工皮肤相比,牛尾胶原构建人工皮肤真皮层的表皮可形成更多层;(5)结果表明,将角质细胞接种于牛尾胶原包埋的成纤维细胞上,可构建更好的人工皮肤。