Alkalibacterium sp. SL3中α-半乳糖苷酶基因的克隆、表达和性质研究

来源 :福州大学学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:kf_haiyang
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以大布苏盐碱湖分离菌Alkalibacterium sp. SL3的DNA为模板,利用PCR扩增α-半乳糖苷酶基因(gal SL3),构建重组质粒pET-22b-gal SL3,转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达重组酶(r Gal SL3).通过镍柱亲和层析分离纯化重组酶,并对纯化的重组酶进行性质研究.研究表明,纯酶r Gal SL3最适pH值为5.5,最适温度为55℃;该酶在pH值5.0~10.0保持90%以上的剩余酶活,在50℃有非常好的热稳定性.在0~1.5 mol·L-1NaCl溶液中该酶的酶活基本不受影响,在3.0 mol·L-1NaCl溶液中有很好的稳定性. Pb2+、Ca2+、Co2+、Li+、Na+、K+、Triton-100和β-mercaptoethanol等对重组酶的活性有明显的促进作用.该酶水解对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷的Km、vmax和kcat分别为(2.64±0.02)μmol·m L-1、(454.55±0.59)μmol·(mg·min)-1和(347.73±1.27) s-1.重组酶可水解蜜二糖和棉籽糖,不能水解瓜尔豆胶.
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