【摘 要】
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目的:构建巢蛋白nestin启动子驱动的微管蛋白表达载体，并在斑马鱼及大鼠神经干细胞中正确表达，为实现神经干细胞/神经前体细胞中微管骨架的动态观察和研究提供工具。方法:设计引物扩增斑马鱼基因组DNA中nestin基因上游启动子-952 bp片段并克隆测序；通过PCR获得斑马鱼EGFP-α-Tubulin融合蛋白序列，构建pzNestin-EGFP-α-Tubulin重组表达质粒；通过显微注射将目的
【机 构】
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南通大学教育部/江苏省神经再生重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31701049,32070725）；
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目的:构建巢蛋白nestin启动子驱动的微管蛋白表达载体，并在斑马鱼及大鼠神经干细胞中正确表达，为实现神经干细胞/神经前体细胞中微管骨架的动态观察和研究提供工具。方法:设计引物扩增斑马鱼基因组DNA中nestin基因上游启动子-952 bp片段并克隆测序；通过PCR获得斑马鱼EGFP-α-Tubulin融合蛋白序列，构建pzNestin-EGFP-α-Tubulin重组表达质粒；通过显微注射将目的质粒导入斑马鱼胚胎并在共聚焦显微镜下观察并拍摄；采用电转法将目的质粒导入大鼠神经干细胞，在荧光显微镜下观察。结果:在荧光显微镜下均观察到斑马鱼胚胎和大鼠神经干细胞中的EGFP荧光蛋白信号。结论:成功构建了pzNestin-EGFP-α-Tubulin质粒，在斑马鱼胚胎和大鼠神经干细胞中均能表达。
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