【摘 要】
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目的制备白念珠菌磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶蛋白Ppt2,用于后期荧光偏振法筛选靶点为Ppt2酶的临床药物.方法以白念珠菌BWP17基因组DNA为模板,用PCR法扩增PPT2DNA序列,与线性化
【机 构】
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上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科,上海交通大学医学院附属瑞金医院卢湾分院放免检验科
【基金项目】
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上海市医学重点专科(ZK2012A21);上海市卫计委课题(201740069);上海市黄浦区卫计委课题(HKM201702)
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目的制备白念珠菌磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶蛋白Ppt2,用于后期荧光偏振法筛选靶点为Ppt2酶的临床药物.方法以白念珠菌BWP17基因组DNA为模板,用PCR法扩增PPT2DNA序列,与线性化载体pET43.1a(+)通过同源重组连接,成功构建重组表达质粒pET43.1a(+)/PPT2后转化入大肠埃希菌感受态细胞BL21(DE3),通过IPTG诱导重组蛋白表达,利用超声破碎法抽提蛋白Ppt2后离心收集上清和沉淀,通过SDS-PAGE验证蛋白的可溶性.利用镍柱对蛋白进行纯化,对洗脱馏分透析富集目的蛋白.最后
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