【摘 要】
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[目的]研究铅暴露诱导的神经毒性损伤作用,明确铅暴露引发神经毒性损伤的部分机制以及硒的保护作用.[材料和方法]铅暴露及补硒动物模型建立：选取孕18天SD母鼠,随机分为对照组,染铅组,染铅补硒组；常规饮食适应3天,产仔后,各组给予不同组分的饮水：对照组饮用去离子水；染铅组饮用含醋酸铅的去离子水,染铅剂量为100 ppm；染铅补硒组饮用含醋酸铅及亚硒酸钠的去离子水,染铅剂量为100 ppm,亚硒酸钠含
【机 构】
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第四军医大学生物医学工程学学员队,西安710032 第四军医大学军事预防医学系军队劳动与环境卫生学
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
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[目的]研究铅暴露诱导的神经毒性损伤作用,明确铅暴露引发神经毒性损伤的部分机制以及硒的保护作用.[材料和方法]铅暴露及补硒动物模型建立：选取孕18天SD母鼠,随机分为对照组,染铅组,染铅补硒组；常规饮食适应3天,产仔后,各组给予不同组分的饮水：对照组饮用去离子水；染铅组饮用含醋酸铅的去离子水,染铅剂量为100 ppm；染铅补硒组饮用含醋酸铅及亚硒酸钠的去离子水,染铅剂量为100 ppm,亚硒酸钠含量为0.2ppm.暴露持续时间为整个哺乳期(21 d).原位凋亡检测(In situ TUNEL assay)：参照TUNEL原位检测法检测海马神经元损伤,组织切片复温后以PBS洗涤5 min/3次；4％多聚甲醛固定细胞5-10 min； 0.1％Triton X-1 00透化15 min； PBS漂洗5 min/3次；1％ BSA封闭30 min；为阴性对照加100μl标记液(管2)；酶反应液(管1)与标记液按1∶9混合；吸收多余液体,使样品周围略干；每样加混合反应液30μl左右,37℃饱和湿度下避光孵育60 min； PBS洗5 min×3次；加入核衬染物DAPI,室温孵育15 min； PBS洗5 min×3次；抗萃灭封片剂封片,激光共聚焦下观察记录实验结果.Western blot检测蛋白表达：配制12％或10％的分离胶和5％的积层胶；每孔上样20μl.电泳80V/30min,120V/90min后,250mA/90min将凝胶中蛋白转移至NC膜；以5％脱脂牛奶室温封闭1h.加一抗,于4℃过夜；TBST洗膜5 min/3次；加相应二抗,37℃孵育1.5h；洗膜15 min/3次；滴加化学荧光试剂,在暗室中用凝胶成像分析仪扫描各免疫印迹条带灰度值并进行分析.[结果]1.哺乳期铅暴露能够引起仔鼠海马神经细胞凋亡的发生；2.铅暴露能够诱导Bax/Bcl-2水平改变,激活Caspase-3.3.同时给予硒干预后,机体抗铅神经毒性能力显著增加.[结论]1.铅暴露能够诱导海马神经部位毒性损伤,损伤可能通过启动凋亡途径而发生,2.补硒能够通过拮抗凋亡发生从而拮抗铅的神经毒性,产生保护作用.
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