【摘 要】
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目的:比较酚-氯仿方法、Chelex-100提取方法、溴化十六烷基三甲铵(CTAB)提取方法及试剂盒提取口腔致病菌DNA的效果。方法:用4种方法提取具核梭杆菌、嗜酸性乳酸杆菌、粘性放
【机 构】
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天津中医药大学第二附属医院口腔科,天津市南开医院口腔科
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目的:比较酚-氯仿方法、Chelex-100提取方法、溴化十六烷基三甲铵(CTAB)提取方法及试剂盒提取口腔致病菌DNA的效果。方法:用4种方法提取具核梭杆菌、嗜酸性乳酸杆菌、粘性放线菌及变形链球菌的DNA,比较OD260、OD260/OD230及OD260/OD280数值,同时进行基因组及扩增后的目的基因电泳,检测DNA的完整性及对PCR的影响。结果:Chelex-100方法提取的样本所含DNA浓度较高,但蛋白类的杂质较多。除粘性放线菌外,其他3种方法去除蛋白类杂质效果的差异无统计学意义。CTAB法和酚-氯仿法都可以较好地去除碳水化合物类杂质,对嗜酸性乳酸杆菌,CTAB的效果最佳(P<0.05)。粘性放线菌对试剂盒提取效果有很大影响。结论:对DNA纯度及完整性要求不高的后续实验,Chelex-100为首选方法,否则经典的酚-氯仿方法及改进后的CTAB方法为首选方法。不同的细菌种类显著影响试剂盒的提取效果。
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