【摘 要】
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从GenBank中获取多个口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组序列,进行多序列比对之后,设计对应于口蹄疫病毒的3D、VP3和3C区域的引物和探针,分别建立了FMDV群
【机 构】
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珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室; 三统万福(青岛)食品有限公司;
【基金项目】
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国家质量监督检验检疫总局项目(No.2004IK133)资助
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从GenBank中获取多个口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组序列,进行多序列比对之后,设计对应于口蹄疫病毒的3D、VP3和3C区域的引物和探针,分别建立了FMDV群特异性实时荧光RT-PCR、O型特异性实时荧光RT-PCR和AsiaⅠ型特异性实时荧光RT-PCR检测方法。三种FMDV实时荧光RT-PCR在Lightcycler荧光PCR仪上扩增均出现标准的S型曲线,并且具有良好的特异性,可以很好地将FMDV与传染性牛鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitisvirus)、猪传染性胃肠炎病毒(Swine transmissible gastroenteritis virus)、赤羽病病毒(Akabane virus)和猪呼吸系统冠状病毒(Porcine respiratory corona virus)区分。FMDV群特异性实时荧光RT-PCR可以成功扩增O型(O1和O2毒株)和AsiaⅠ型(AsiaⅠ1和AsiaⅠ2毒株)FMDV;O型特异性实时荧光RT-PCR可成功扩增O型(O1和O2毒株)FMDV,AsiaⅠ型(AsiaⅠ1和AsiaⅠ2毒株)FMDV为阴性;AsiaⅠ型特异性实时荧光RT-PCR可成功扩增AsiaⅠ型(AsiaⅠ1和AsiaⅠ2毒株)FMDV,O型(O1和O2毒株)FMDV为阴性。FMDV群特异性实时荧光RT-PCR、O型特异性实时荧光RT-PCR和AsiaⅠ型特异性实时荧光RT-PCR都可以检测到10个拷贝的模板,灵敏度接近检测方法的极限。检测时间短,从加样到反应结束只需要70 min。该方法有潜力用于FMDV的实验室筛查与鉴别诊断。
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