【摘 要】
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【目的】克隆牛EGR2基因转录本X1（EGR2-X1）的CDS区，检测其在不同组织和前体脂肪细胞分化过程中的表达模式并预测其编码蛋白的结构与功能。【方法】采用PCR结合测序技术扩增牛EGR2-X1的CDS区，胶原酶消化法分离牛前体脂肪细胞，利用实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR， RT-qPCR）检测EGR2-X1在牛的心、肝、脾、肺、肾、肌肉和背部脂肪组织中
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（32072720）； 宁夏回族自治区重点研发项目（2021BEF01002、2021NXZD1）； 宁夏回族自治区科技创新领军人才培养项目（2020GKLRLX02）；
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【目的】克隆牛EGR2基因转录本X1（EGR2-X1）的CDS区，检测其在不同组织和前体脂肪细胞分化过程中的表达模式并预测其编码蛋白的结构与功能。【方法】采用PCR结合测序技术扩增牛EGR2-X1的CDS区，胶原酶消化法分离牛前体脂肪细胞，利用实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR， RT-qPCR）检测EGR2-X1在牛的心、肝、脾、肺、肾、肌肉和背部脂肪组织中的表达规律及前体脂肪细胞分化过程中的时序表达模式，同时利用ProtParam、Phyre2、NetPhos 3.1等软件分析EGR2-X1的理化性质与蛋白结构。【结果】成功克隆牛EGR2-X1的CDS区，其CDS区全长1458 bp，编码一条由485个氨基酸构成的不稳定且不存在跨膜结构与信号肽的亲水性蛋白，该蛋白含有3个典型的锌指结构域，其氨基酸主要由无规卷曲和延伸链构成，主要在细胞核内发挥作用，同时，蛋白互作网络预测发现，EGR2-X1可能与SOX10、EGR1、EGR3等蛋白存在互作关系。系统进化树分析发现普通牛与水牛亲缘关系最近，与斑马鱼亲缘关系最远，表明EGR2-X1蛋白在物种间保守性较强。组织表达谱分析显示，EGR2-X1在心、肝、脾、肺、肾、肌肉和背部脂肪组织中均有表达，在肺脏中表达量最高，背部脂肪和肝脏中表达量次之，肾脏中表达量最少。细胞时序表达谱表明，EGR2-X1在第3天表达量最高，此后逐渐下降，至第7天表达量最低。【结论】EGR2-X1在调控牛脂肪细胞的增殖分化和脂质代谢过程中发挥重要功能。
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