【摘 要】
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目的:建立金色链霉菌基因敲除体系,敲除金色链霉菌J13中的ctcF基因,研究工程菌的代谢变化。方法:采用基因置换和框内缺失技术,对ctcF基因进行敲除。结果:利用接合转移的方法,
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(“重要抗生素西索米星高低产菌种生物合成基因簇的比较研究”,31070093);福建省教育厅科研项目(“暗霉素生物合成关键基因的克隆及其功能研究”,2007F5070)资助
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目的:建立金色链霉菌基因敲除体系,敲除金色链霉菌J13中的ctcF基因,研究工程菌的代谢变化。方法:采用基因置换和框内缺失技术,对ctcF基因进行敲除。结果:利用接合转移的方法,将质粒pFD109导入到金色链霉菌J13中,经抗性筛选及PCR验证获得ctcF基因置换菌株金色链霉菌A1-20;将质粒pFD111经接合转移导入到A1-20中,获得ctcF基因框内缺失菌株金色链霉菌K2-46;以上工程菌的发酵组分经HPLC分析,发现金霉素发酵单位显著降低。结论:获得的接合子发生双交换的概率可达18%以上,建立及验证了金色链霉菌基因敲除体系的实用性和可操作性,并初步推测ctcF为金霉素生物合成中的调控基因。
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