研究辐射对人胚肺成纤维细胞HFL-1的基因表达及对转化生长因子β1 (TGF-β1)的影响,探讨TGF-β1 siRNA对受照HFL-1细胞胶原合成的干预作用。
方法将HFL-1细胞分为单纯照射组和空白对照组,予6 MV X射线500 cGy单次照射,照后24 h以基因芯片法分析两组基因表达差异及TGF-β1的表达差异;将HFL-1细胞分为单纯照射组、阴性对照siRNA组和TGF-β1 siRNA组,照射后24 h采用RT-PCR、ELISA、免疫组织化学及Western blot观察TGF-β1 siRNA对TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原生成的干预作用;将HFL-1细胞分为地塞米松组、TGF-β1 siRNA组及TGF-β1 siRNA联合地塞米松组,以RT-PCR、免疫组织化学及Western blot观察照射后24 h不同干预方法对TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原生成的影响。
结果芯片检测显示HFL-1细胞受照后基因表达谱明显改变,TGF-β1基因上调;单纯照射组TGF-β1基因(t=-18.580, P<0.001)、TGF-β1蛋白(t=-12.445, P<0.001)和羟脯氨酸(HYP)(t=-3.987,P=0.016)表达明显高于空白对照组。与单纯照射组比较,TGF-β1 siRNA组、地塞米松组和联合组的TGF-β1(t=13.235、6.943、-17.431, P<0.05)、α-SMA(t=12.548、6.966、13.988, P<0.05)、Ⅰ型(t=12.433、8.164、16.315, P<0.05)及Ⅲ型胶原(t=5.919、3.164、9.420, P<0.05)的表达均明显下降,且TGF-β1 siRNA组优于地塞米松组(t=7.110、7.976、4.196、5.935, P<0.05)。
结论放射诱导HFL-1细胞基因表达谱明显改变,TGF-β1上调;TGF-β1 siRNA能有效沉默TGF-β1基因,干预Ⅰ、Ⅲ型胶原的产生;TGF-β1 siRNA干预胶原形成优于地塞米松。