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摘 要：为研究齐齐哈尔汉族人群DYS393等11个Y-STR基因座的遗传多态性并用于法医学鉴定，通过采用PCR复合扩增和基因测序仪检测方法，检查126个无关男性个体，调查齐齐哈尔汉族的11个Y-STR基因座的单倍型频率。结果表明11个Y-STR基因座具有丰富的遗传多态性，可用于法医学个体识别和亲子鉴定。
人类Y染色体特异的短串联重复序列（Y-STR）基因座是位于男性Y染色体上的人类多态性STR位点，一般情况下，只有男性个体才有Y染色体，因此，Y- S T R具有男性遗传，男性特异性的特点.Y- S T R即可作为性别鉴定的依据，同时在法医学精斑及混合斑检验中发挥着重要作用。本研究采用PCR复合扩增和基因测序的检测方法，分析DYS393、DYS389、DYS389Ⅱ、DYS439、DYS438、DYS437、DYS19、DYS392、DYS391、DYS390和DYS385等11个Y-STR基因座在齐齐哈尔汉族群体中的遗传多态性及其分布特征，现报告如下。
1 材料和方法
1.1研究对象
126名齐齐哈尔汉族无关男性个体，均为本实验室鉴定案件所积累，每人取静脉血2ml，5%EDTA抗凝。
1.2检测方法
1.2.1 DNA提取
采用Chelex-100方法[1]提取DNA
1.2.2 PCR扩增
采用Promega（普洛麦格）公司PowerPlex？誖 Y System，对DYS393等11个Y-STR基因座在同一个反应体系中进行复合扩增。总PCR反应体系为10μL，内含Master Mix 1μL，Primer Pair Mix 1μL，金牌Taq酶0.25μL，d H2O 6.75，DNA 1μL。扩增采用ABI 9700型PCR扩增仪。循环参数为95℃ 11min→96℃ 1min→94℃ 30s→60℃ 30s→70℃ 45s→90℃ 30s→58℃ 30s→70℃ 45s→60℃ 30min→4℃ 保存。
1.2.3 PCR扩增产物的检测及结果分析
PCR产物用美国ABI 3130XL DNA测序仪分析。PCR产物1.0μL，ILS600内标0.8μL，Hi-Di 10.0μL，混勻编号，放入电泳仪中。GeneMapper？誖 ID Software v3.3软件分析Y-STR基因型。各基因座的不同等位基因，按照国际法医遗传学会DNA委员会（ISFG）推荐的命名原则进行命名[2]。
1.2.4数据处理
单倍型检出频率用直接计数法，基因多样性及单倍型多样性按公式GD=n（1-Pi2）/（n-1）计算（Pi为等位基因或单倍型频率）计算。[3]
2结果与分析
检测126份无关男性样本，DYS393基因座检出6个等位基因，GD值0.6840634836；DYS389Ⅰ基因座检出5个等位基因，GD值0.66412695；DYS389Ⅱ基因座检出8个等位基因GD值0.777809779，DYS439基因座检出6个等位基因，GD值0.674285722；DYS438基因座检出5个等位基因，GD值0.428317509；DYS437基因座检出3个等位基因，GD值0.4011429333；DYS19基因座检出5个等位基因，GD值0.7489523326；DYS392基因座检出5个等位基因，GD值0.7506031934；DYS391基因座检出4个等位基因，GD值0.464634921；DYS390基因座检出5个等位基因，GD值0.6896507423；DYS385基因座检出38个等位基因，GD值0.4541583306。GD值最高的为0.777809779（DYS389Ⅱ），GD值最低的为0.4011429333（DYS437）。11个Y-STR基因座的单倍型共112种，单倍型多样性达0.985260771。
3讨论
Y-STR基因座为人类男性所特有，按单倍型父系遗传；对正常女性DNA进行Y-STR分型，结果为阴性；并且在女性DNA含量很高的背景下，可以不受女性成分的干扰；适合应用于混合样品的检测分析。因此，Y-STR基因座在法医学个体识别和父权鉴定中具有特殊应用价值，同时也适合应用于无创伤害性产前分子遗传分析。
本研究调查126例齐齐哈尔汉族无关男性个体，检出DYS393基因座的6个等位基因，DYS389Ⅰ基因座的5个等位基因，DYS389Ⅱ基因座的8个等位基因，DYS439基因座的6个等位基因，DYS438基因座的5个等位基因，DYS437基因座的3个等位基因，DYS19基因座的5个等位基因，DYS392基因座的5个等位基因，DYS391基因座的4个等位基因，DYS390基因座的5个等位基因，DYS385基因座的38个等位基因；共检出112种单倍型，单倍型多样性达0.985260771，获得了齐齐哈尔汉族群体的11个Y-STR基因座单倍型频率等数据，表明该系统具有较强的个体差异，显示齐齐哈尔汉族群体的11个Y-STR基因座具有丰富的遗传多态性。
参考文献（References）：
[1] Walsh PS， Metzger DA， Higuchi R. Chelex 100 as a medium for simple extraction of DNA for P CR-based typing from forensic material.Biotechniques，1991，10：506～518
[2] Gill P， Brenner C， Brinkman B， Budowle B， Carracedo A， Jobling M A， Kayser M， Krawczak M， Mayr W， Morling N， Olaisen B， Pascali V， Prinz M， Roewer L， Schneider P M， Sajantila A， Tyler-Smith. DNA Commission of the International Society of Forensic Genetics： recommendations on forensic analysis using Y-chromosome STRs. Forensic Sci Int， 2001， 124 ： 5～10
[3] Carracedo A， Beckmann A， Bengs A . Result of a collaborative study of EDNAP group regarding the reproducibility and robustness of the Y-chromosome STRs DYS19， DYS389Ⅰand DYS389Ⅱ， DYS390 and DYS393 in a PCR pentaplex format. Forensic Sci Int，2001，119：28.
人类Y染色体特异的短串联重复序列（Y-STR）基因座是位于男性Y染色体上的人类多态性STR位点，一般情况下，只有男性个体才有Y染色体，因此，Y- S T R具有男性遗传，男性特异性的特点.Y- S T R即可作为性别鉴定的依据，同时在法医学精斑及混合斑检验中发挥着重要作用。本研究采用PCR复合扩增和基因测序的检测方法，分析DYS393、DYS389、DYS389Ⅱ、DYS439、DYS438、DYS437、DYS19、DYS392、DYS391、DYS390和DYS385等11个Y-STR基因座在齐齐哈尔汉族群体中的遗传多态性及其分布特征，现报告如下。
1 材料和方法
1.1研究对象
126名齐齐哈尔汉族无关男性个体，均为本实验室鉴定案件所积累，每人取静脉血2ml，5%EDTA抗凝。
1.2检测方法
1.2.1 DNA提取
采用Chelex-100方法[1]提取DNA
1.2.2 PCR扩增
采用Promega（普洛麦格）公司PowerPlex？誖 Y System，对DYS393等11个Y-STR基因座在同一个反应体系中进行复合扩增。总PCR反应体系为10μL，内含Master Mix 1μL，Primer Pair Mix 1μL，金牌Taq酶0.25μL，d H2O 6.75，DNA 1μL。扩增采用ABI 9700型PCR扩增仪。循环参数为95℃ 11min→96℃ 1min→94℃ 30s→60℃ 30s→70℃ 45s→90℃ 30s→58℃ 30s→70℃ 45s→60℃ 30min→4℃ 保存。
1.2.3 PCR扩增产物的检测及结果分析
PCR产物用美国ABI 3130XL DNA测序仪分析。PCR产物1.0μL，ILS600内标0.8μL，Hi-Di 10.0μL，混勻编号，放入电泳仪中。GeneMapper？誖 ID Software v3.3软件分析Y-STR基因型。各基因座的不同等位基因，按照国际法医遗传学会DNA委员会（ISFG）推荐的命名原则进行命名[2]。
1.2.4数据处理
单倍型检出频率用直接计数法，基因多样性及单倍型多样性按公式GD=n（1-Pi2）/（n-1）计算（Pi为等位基因或单倍型频率）计算。[3]
2结果与分析
检测126份无关男性样本，DYS393基因座检出6个等位基因，GD值0.6840634836；DYS389Ⅰ基因座检出5个等位基因，GD值0.66412695；DYS389Ⅱ基因座检出8个等位基因GD值0.777809779，DYS439基因座检出6个等位基因，GD值0.674285722；DYS438基因座检出5个等位基因，GD值0.428317509；DYS437基因座检出3个等位基因，GD值0.4011429333；DYS19基因座检出5个等位基因，GD值0.7489523326；DYS392基因座检出5个等位基因，GD值0.7506031934；DYS391基因座检出4个等位基因，GD值0.464634921；DYS390基因座检出5个等位基因，GD值0.6896507423；DYS385基因座检出38个等位基因，GD值0.4541583306。GD值最高的为0.777809779（DYS389Ⅱ），GD值最低的为0.4011429333（DYS437）。11个Y-STR基因座的单倍型共112种，单倍型多样性达0.985260771。
3讨论
Y-STR基因座为人类男性所特有，按单倍型父系遗传；对正常女性DNA进行Y-STR分型，结果为阴性；并且在女性DNA含量很高的背景下，可以不受女性成分的干扰；适合应用于混合样品的检测分析。因此，Y-STR基因座在法医学个体识别和父权鉴定中具有特殊应用价值，同时也适合应用于无创伤害性产前分子遗传分析。
本研究调查126例齐齐哈尔汉族无关男性个体，检出DYS393基因座的6个等位基因，DYS389Ⅰ基因座的5个等位基因，DYS389Ⅱ基因座的8个等位基因，DYS439基因座的6个等位基因，DYS438基因座的5个等位基因，DYS437基因座的3个等位基因，DYS19基因座的5个等位基因，DYS392基因座的5个等位基因，DYS391基因座的4个等位基因，DYS390基因座的5个等位基因，DYS385基因座的38个等位基因；共检出112种单倍型，单倍型多样性达0.985260771，获得了齐齐哈尔汉族群体的11个Y-STR基因座单倍型频率等数据，表明该系统具有较强的个体差异，显示齐齐哈尔汉族群体的11个Y-STR基因座具有丰富的遗传多态性。
参考文献（References）：
[1] Walsh PS， Metzger DA， Higuchi R. Chelex 100 as a medium for simple extraction of DNA for P CR-based typing from forensic material.Biotechniques，1991，10：506～518
[2] Gill P， Brenner C， Brinkman B， Budowle B， Carracedo A， Jobling M A， Kayser M， Krawczak M， Mayr W， Morling N， Olaisen B， Pascali V， Prinz M， Roewer L， Schneider P M， Sajantila A， Tyler-Smith. DNA Commission of the International Society of Forensic Genetics： recommendations on forensic analysis using Y-chromosome STRs. Forensic Sci Int， 2001， 124 ： 5～10
[3] Carracedo A， Beckmann A， Bengs A . Result of a collaborative study of EDNAP group regarding the reproducibility and robustness of the Y-chromosome STRs DYS19， DYS389Ⅰand DYS389Ⅱ， DYS390 and DYS393 in a PCR pentaplex format. Forensic Sci Int，2001，119：28.