论文部分内容阅读
【摘要】 目的 分析检测中药饮片对多重抗生素耐药细菌的抑菌作用。方法 选用稀释法，分析检测24种常用中药饮片的水煎液对大肠杆菌的多重抗生素耐药菌种和敏感菌种的抑菌效果。结果 大多数中药对敏感菌和耐药菌的抑菌效果没有明显差别，其中只有连翘、决明子和甘草表现出明显的抑菌差别。并且，耐药菌相对于敏感菌来说对中药更为敏感。结论 只有少数中药对敏感菌和耐药菌的抑菌效果存在差别，同时耐药菌比敏感菌对中药的敏感度更高，提示中药治疗细菌感染疾病可能会更具优越性。
【关键词】 中药饮片；抗生素耐药细菌；抑菌效果；敏感菌种
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.05.014 文章编号：1004-7484（2014）-05-2418-02
The bacteriostasis of Chinese medicine in multiple antibiotic-resistant bacteria
【Abstract】Objective To analyze and detect the antibacterial effect of Chinese medicine on multiple antibiotic resistant bacteria.Methods Agar dilution method was used to analysis the antimicrobial effect of water decoction of 24 Chinese medicines on multiple antibiotic escherichia coli resistant bacteria and sensitive strain.Results To the most Chinese medicine，there was no significant difference in the inhibitory effect between sensitive strain and resistant bacteria，except forsythia，cassia seed and licorice.Conclusion Only a little of Chinese medicine was difference in the bacteriostasis as to the sensitive bacteria and drug resistance bacteria.While drug resistance bacteria was more sensitivity than the sensitive bacteria to the traditional Chinese medicine.The Chinese medicine treatment may have a more advantages in the treatment of bacterial infections.
【Key words】 Chinese medicine；Antibiotic-resistant bacteria；Antibacterial effect；Susceptible
多重抗生素耐药细菌是指一种能对3类或3类以上抗生素产生耐药的微生物[1]。近年来，随着抗生素应用的日益广泛和频繁，抗生素耐药菌已成为医疗界感染普遍存在的一个重要问题。据报道，在美国每年约有30万患者因感染金黄色葡萄球菌而入院，其中有超过40%的患者是由于受到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株的感染[2]。目前多重抗生素耐药细菌的产生和流行已经对社会造成了巨大的危害，它们的出现会造成感染复发，引起临床治疗的失败，严重威胁到人们生命安全。因此，寻找能对抗多重抗生素耐药细菌、代替抗生素来抑制病菌感染的药物是众多研究者关注的课题之一。已有研究报道众多传统中药材对微生物具有一定的抑制作用[3]，本文研究了24种常见的中药饮片对多重抗生素耐药细菌的抑菌作用，旨在为中药材在多重耐药菌引起疾病中的应用提供参考和依据。
1 资料与方法
1.1 实验药材和药品 左氧氟沙星（山东鲁抗制药），阿奇霉素（西安利君制药），头孢噻肟钠（齐鲁制药），硫酸庆大霉素（山东鲁抗制药），所有中药饮片均为我院药剂科提供。
1.2 实验菌种 大肠杆菌ATCC25922（标准敏感菌种，实验室保存），大肠杆菌S（临床分离的敏感菌种），大肠杆菌R（临床分离的耐药菌种，对庆大霉素、头孢吡肟、氨曲南、丁胺卡那、头孢噻肟钠等多种抗生素有耐药性）
1.3 培养基 培养基为MH培养基或营养琼脂，由南京一基生化科技有限公司提供。
1.4 中药饮片水煎液的制备 采用传统的方法对中药饮片进行煎煮，将适量饮片置于砂锅中，加水至高出药材4cm左右，浸泡30分钟后，中火煎煮30分钟，将药液倒出，过滤，取滤液，于4℃冰箱中保存，备用。
1.5 中药平板的制作以及最低抑菌浓度（MIC）的测定 分别制作含中药400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125mg/mL的MH培养基，在高温下进行湿热灭菌半个小时，倾入平板，制备成含有中药梯度的平板。吸取新鲜的菌悬液10μL（约100CFU/mL）点种于各中药平板上，37℃下培养24小时，观察各菌种的生长趋势，计算其MIC。抗生素的MIC参考《微生物学试验指导》中的稀释法进行。
2 结果
2.1 菌种对抗生素敏感性验证 首先，就临床分离的菌种对抗生素的敏感性进行验证。以药敏纸片法对抗生素的耐受性进行测定，结果表明临床分离的耐药性大肠杆菌为多重耐药菌种。其次，比较大肠杆菌的标准敏感菌种和临床分离的大肠杆菌敏感菌种对抗生素的敏感度。结果表明，见表1。临床分离的和标准的敏感菌种对抗生素敏感度一致，无统计学差异。提示临床分离的耐药菌和敏感菌均可用于后续的中药试验。
2.2 中药对耐药菌和敏感菌的MIC 24种常见中药材对临床分离的耐药菌和敏感菌的MIC，见表2。
3 讨论
据文献报道，中药对临床分离的敏感菌和标准敏感菌的MIC存在一定的差异。因此，本研究以分离的敏感菌及耐药菌同时用于试验，更有说服力。同时，本研究试验前先后对实验菌种的耐药性和敏感性进行了检测，结果表明，试验菌种均符合要求，提示这些菌种可用于中药的抑菌试验中，这样所测得结果的可信度高。
中药在临床的治疗时，其本身即存在着不明确的“量效关系”，表现出的疗效的不稳定，重复性差。所以在采用稀释法就中药的试验菌株MIC进行测定时，从表3中结果可以看出，重复的2次试验中会出现较大的差别，因此2次结果不便作简单的平均处理。考虑到结果的偏差值较大，在数据处理时，本研究将数据相差4倍甚至更多的数据结果视为“存在有明显差异”。结果提示，大多数的中药饮片对敏感菌种和耐药菌种的抑菌效果没有明显差别，而只有连翘、决明子和甘草表现出明显的抑菌效果差别。另外，从表3中结果还可以看出，防风、大黄、连翘、黄柏、蒲公英等多种中药对大肠杆菌耐药菌种的MIC较临床分离的敏感菌种来说稍低，表明抗生素的耐药性菌种对中药的敏感性不变甚至是敏感性增加，这个结果同时提示，中药在治疗临床细菌性感染疾病时存在着独特的优越性，特别是在抗生素治疗失败的时候，中药治疗的意义重大。
参考文献
[1] 张景皓，肖明霞，季萍.黄芩、黄连、五味子对5种多重耐药菌抑菌作用的实验研究[J].新疆医学，2012，42（2）：4-7.
[2] 黄暨生，马嫚，邝枣园.自拟中药复方对耐药性金黄色葡萄球菌的抑菌作用研究[J].广州中医药大学学报，2012，29（1）：53-55.
[3] 邱庆连，潘清清，张友平.五倍子、乌梅等45种中草药提取物对锯缘青蟹致病弧菌的抑菌作用研究[J].浙江海洋学院学报：自然科学版，2010，29（1）：34-38.
【关键词】 中药饮片；抗生素耐药细菌；抑菌效果；敏感菌种
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.05.014 文章编号：1004-7484（2014）-05-2418-02
The bacteriostasis of Chinese medicine in multiple antibiotic-resistant bacteria
【Abstract】Objective To analyze and detect the antibacterial effect of Chinese medicine on multiple antibiotic resistant bacteria.Methods Agar dilution method was used to analysis the antimicrobial effect of water decoction of 24 Chinese medicines on multiple antibiotic escherichia coli resistant bacteria and sensitive strain.Results To the most Chinese medicine，there was no significant difference in the inhibitory effect between sensitive strain and resistant bacteria，except forsythia，cassia seed and licorice.Conclusion Only a little of Chinese medicine was difference in the bacteriostasis as to the sensitive bacteria and drug resistance bacteria.While drug resistance bacteria was more sensitivity than the sensitive bacteria to the traditional Chinese medicine.The Chinese medicine treatment may have a more advantages in the treatment of bacterial infections.
【Key words】 Chinese medicine；Antibiotic-resistant bacteria；Antibacterial effect；Susceptible
多重抗生素耐药细菌是指一种能对3类或3类以上抗生素产生耐药的微生物[1]。近年来，随着抗生素应用的日益广泛和频繁，抗生素耐药菌已成为医疗界感染普遍存在的一个重要问题。据报道，在美国每年约有30万患者因感染金黄色葡萄球菌而入院，其中有超过40%的患者是由于受到耐甲氧西林金黄色葡萄球菌菌株的感染[2]。目前多重抗生素耐药细菌的产生和流行已经对社会造成了巨大的危害，它们的出现会造成感染复发，引起临床治疗的失败，严重威胁到人们生命安全。因此，寻找能对抗多重抗生素耐药细菌、代替抗生素来抑制病菌感染的药物是众多研究者关注的课题之一。已有研究报道众多传统中药材对微生物具有一定的抑制作用[3]，本文研究了24种常见的中药饮片对多重抗生素耐药细菌的抑菌作用，旨在为中药材在多重耐药菌引起疾病中的应用提供参考和依据。
1 资料与方法
1.1 实验药材和药品 左氧氟沙星（山东鲁抗制药），阿奇霉素（西安利君制药），头孢噻肟钠（齐鲁制药），硫酸庆大霉素（山东鲁抗制药），所有中药饮片均为我院药剂科提供。
1.2 实验菌种 大肠杆菌ATCC25922（标准敏感菌种，实验室保存），大肠杆菌S（临床分离的敏感菌种），大肠杆菌R（临床分离的耐药菌种，对庆大霉素、头孢吡肟、氨曲南、丁胺卡那、头孢噻肟钠等多种抗生素有耐药性）
1.3 培养基 培养基为MH培养基或营养琼脂，由南京一基生化科技有限公司提供。
1.4 中药饮片水煎液的制备 采用传统的方法对中药饮片进行煎煮，将适量饮片置于砂锅中，加水至高出药材4cm左右，浸泡30分钟后，中火煎煮30分钟，将药液倒出，过滤，取滤液，于4℃冰箱中保存，备用。
1.5 中药平板的制作以及最低抑菌浓度（MIC）的测定 分别制作含中药400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125mg/mL的MH培养基，在高温下进行湿热灭菌半个小时，倾入平板，制备成含有中药梯度的平板。吸取新鲜的菌悬液10μL（约100CFU/mL）点种于各中药平板上，37℃下培养24小时，观察各菌种的生长趋势，计算其MIC。抗生素的MIC参考《微生物学试验指导》中的稀释法进行。
2 结果
2.1 菌种对抗生素敏感性验证 首先，就临床分离的菌种对抗生素的敏感性进行验证。以药敏纸片法对抗生素的耐受性进行测定，结果表明临床分离的耐药性大肠杆菌为多重耐药菌种。其次，比较大肠杆菌的标准敏感菌种和临床分离的大肠杆菌敏感菌种对抗生素的敏感度。结果表明，见表1。临床分离的和标准的敏感菌种对抗生素敏感度一致，无统计学差异。提示临床分离的耐药菌和敏感菌均可用于后续的中药试验。
2.2 中药对耐药菌和敏感菌的MIC 24种常见中药材对临床分离的耐药菌和敏感菌的MIC，见表2。
3 讨论
据文献报道，中药对临床分离的敏感菌和标准敏感菌的MIC存在一定的差异。因此，本研究以分离的敏感菌及耐药菌同时用于试验，更有说服力。同时，本研究试验前先后对实验菌种的耐药性和敏感性进行了检测，结果表明，试验菌种均符合要求，提示这些菌种可用于中药的抑菌试验中，这样所测得结果的可信度高。
中药在临床的治疗时，其本身即存在着不明确的“量效关系”，表现出的疗效的不稳定，重复性差。所以在采用稀释法就中药的试验菌株MIC进行测定时，从表3中结果可以看出，重复的2次试验中会出现较大的差别，因此2次结果不便作简单的平均处理。考虑到结果的偏差值较大，在数据处理时，本研究将数据相差4倍甚至更多的数据结果视为“存在有明显差异”。结果提示，大多数的中药饮片对敏感菌种和耐药菌种的抑菌效果没有明显差别，而只有连翘、决明子和甘草表现出明显的抑菌效果差别。另外，从表3中结果还可以看出，防风、大黄、连翘、黄柏、蒲公英等多种中药对大肠杆菌耐药菌种的MIC较临床分离的敏感菌种来说稍低，表明抗生素的耐药性菌种对中药的敏感性不变甚至是敏感性增加，这个结果同时提示，中药在治疗临床细菌性感染疾病时存在着独特的优越性，特别是在抗生素治疗失败的时候，中药治疗的意义重大。
参考文献
[1] 张景皓，肖明霞，季萍.黄芩、黄连、五味子对5种多重耐药菌抑菌作用的实验研究[J].新疆医学，2012，42（2）：4-7.
[2] 黄暨生，马嫚，邝枣园.自拟中药复方对耐药性金黄色葡萄球菌的抑菌作用研究[J].广州中医药大学学报，2012，29（1）：53-55.
[3] 邱庆连，潘清清，张友平.五倍子、乌梅等45种中草药提取物对锯缘青蟹致病弧菌的抑菌作用研究[J].浙江海洋学院学报：自然科学版，2010，29（1）：34-38.