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目的
研究大黄素对布鲁菌侵染巨噬细胞免疫功能的调节,为探寻新的药物治疗布鲁菌病提供理论和实验依据。
方法取BALB/c小鼠分离骨髓细胞,加入MG-CSF诱导分化培养,用小鼠F4/80抗体、CD11b抗体标记细胞,流式检测骨髓细胞分化为巨噬细胞(MΦ)的比例;通过MTT法检测不同浓度大黄素对小鼠MΦ存活率的影响,同时以多西环素为对照,比较两种药物的半抑制浓度(IC50);用布鲁菌侵染巨噬细胞(MΦ和细菌比例为100∶1)培养4 h,然后加入大黄素作用后,培养1、6、12、24、48 h,通过菌落计数法检测大黄素对MΦ内布鲁菌存活的影响,然后用ELISA法检测MΦ培养上清中细胞因子TNF-α、IL-6、IFN-γ的含量。
结果培养第8天,骨髓细胞诱导分化为巨噬细胞的比例为91.28%;大黄素的IC50(608.4 μg/ml)明显高于多西环素的IC50(225.5 μg/ml);菌落计数结果:6、12、24、48 h大黄素组logCFU值均显著低于空白组,大黄素组间比较,24 h大黄素组的logCFU值最低,且低于多西环素组;ELISA结果显示,与对照组比较,6、12、24 h大黄素组TNF-α、IL-6、IFN -γ含量明显增加,24 h大黄素组TNF-α、IL-6、IFN-γ含量最高;而12 h大黄素组IFN-γ含量[(74.233±4.416) pg/ml]与24 h大黄素组[(78.328±8.932) pg/ml]比较,差异无统计学意义。
结论大黄素能够通过刺激TNF-α、IL-6、IFN-γ表达量增加,增强巨噬细胞杀伤布鲁菌的能力。