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目的
模拟颅脑创伤(TBI)后的化学微环境,探讨该微环境对神经干细胞(NSCs)存活和分化的影响。
方法获取TBI大鼠损伤区脑组织的匀浆液,用于模拟TBI后的化学微环境。分离、提取并培养大鼠原代NSCs,采用免疫荧光染色鉴定其表型。将实验分为对照组、正常脑组织提取液组(BTE组)和创伤脑组织提取液组(TBITE组)。动态观察各组细胞的生长情况和形态变化,24 h后行Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3及Cleaved caspase-3的表达水平;3 d后采用噻唑蓝实验和Western Blot检测NSCs的增殖情况;7 d后行免疫荧光染色检测NSCs向神经元分化的水平。
结果Western Blot结果显示,与对照组相比,BTE组无明显细胞凋亡变化,而TBITE组NSCs凋亡显著增多,Bax(F=18.06,P<0.01)和Cleaved caspase-3(F=23.86,P<0.01)表达升高,Bcl-2表达降低(F=22.95, P<0.01),差异均具有统计学意义。噻唑蓝实验结果显示,与BTE组相比,TBITE组NSCs增殖水平降低(F=41.99, P<0.01),差异具有统计学意义。免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,BTE组神经元分化率升高;而与BTE组相比,TBITE组神经元分化率降低(F=66.93,P<0.01),差异均具有统计学意义。
结论TBI后的损伤微环境可显著抑制NSCs的存活和分化能力,从而为明确TBI后内源性神经的再生机制提供了理论基础。