【摘 要】
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目的 构建屎肠球菌类透明质酸酶基因(hyl)突变株,研究hyl基因的功能.方法 用自杀质粒pTX4577通过体内同源重组,筛选获得hyl基因的突变株,研究体外hyl基因缺失对突变株生长能力的影响.通过小鼠腹膜炎和兔心内膜炎模型研究体内突变株的毒力情况.结果 经同源重组,利用卡那霉素抗性筛选,PCR、脉冲场电泳和Southern印迹进行鉴定获得hyl基因突变株*hyl,突变株在体外的生长能力低于野生
【机 构】
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云南大理学院基础医学院微生物学教研室,400016,重庆医科大学附属第一医院感染科,重庆市传染病寄生虫病学重点实验室,400016,重庆医科大学附属第一医院感染科,重庆市传染病寄生虫病学重点实验室,4
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目的 构建屎肠球菌类透明质酸酶基因(hyl)突变株,研究hyl基因的功能.方法 用自杀质粒pTX4577通过体内同源重组,筛选获得hyl基因的突变株,研究体外hyl基因缺失对突变株生长能力的影响.通过小鼠腹膜炎和兔心内膜炎模型研究体内突变株的毒力情况.结果 经同源重组,利用卡那霉素抗性筛选,PCR、脉冲场电泳和Southern印迹进行鉴定获得hyl基因突变株*hyl,突变株在体外的生长能力低于野生株.小鼠腹膜炎模型中,在相同细菌感染浓度(3.7×109 CFU/ml)下,野生株TX2466组小鼠在100 h内的存活率为0,而*hyl组小鼠的存活率为50%,差异有统计学意义(P《0.01).兔心内膜炎模型中,TX2466组主动脉瓣和壁性赘生物的菌落计数分别为(3.04±0.63)×106 CFU/g和(6.87±0.58)× 106 CFU/g,而*hyl组则分别为(0.21±0.06)×106 CFU/g和(0.66±0.05)×106 CFU/g,差异有统计学意义(P《0.01).结论 hyl基因突变株构建成功,hyl基因在屎肠球菌致病中起着重要的作用,可能是屎肠球菌的毒力因子之一。
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