【摘 要】
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目的建立O型口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）血清抗体的竞争ELISA检测方法,并进行验证。方法采用O型FMDV病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）作为包被抗原,建立用于检测FMDV血清抗体的竞争ELISA方法。对方法的抗原包被浓度（0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7、0. 8、0. 9、1.
【基金项目】
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国家重点研发计划（2016YFD0500700、2016YFE0204100、2017YFD0500900、2017YFD0501100）； 黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目（YJSCX2017-Y43）；
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目的建立O型口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus,FMDV）血清抗体的竞争ELISA检测方法,并进行验证。方法采用O型FMDV病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）作为包被抗原,建立用于检测FMDV血清抗体的竞争ELISA方法。对方法的抗原包被浓度（0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7、0. 8、0. 9、1. 0μg/mL）、抗原包被温度及时间（4℃过夜、37℃1 h、37℃1.5 h、37℃2 h、37℃2. 5 h、37℃3 h）、血清稀释度（1∶2、1∶4、1∶8、1∶16稀释）、HRP-IgG稀释度（1∶10 000～1∶20 000稀释）、封闭液种类（不封闭、1%BSA封闭、2%BSA封闭、5%脱脂乳封闭）、封闭液作用时间（30、60、90、120 min）、血清与HRP-IgG作用时间（30、60、90、120、150 min）、底物TMB作用时间（10、15、20、25、30 min）进行优化。同时验证方法的交叉反应、特异性及敏感性、精密性。采用建立的方法及O型FMDV抗体液相阻断ELISA检测试剂盒分别检测未知血清背景的138份猪和牛血清,计算两者的符合率。结果方法最适检测条件为:抗原包被浓度0. 5μg/mL,抗原包被温度及时间为4℃过夜,血清稀释度为1∶4;HRP-IgG稀释度为1∶18 000;封闭液为1%BSA,封闭液作用时间为30 min;HRP-IgG与血清作用时间为30 min;底物作用时间为10 min。21份不同猪病的阳性血清中,除3份O型FMD阳性血清为阳性外,其他血清样品为阴性,该方法无交叉反应;敏感性为90. 4%,特异性为95. 7%;批内和批间精密性试验变异系数（CV）均<10%。该方法与口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测结果的符合率为97%。结论建立的方法具有良好的特异性及精密性,且操作简便,可用于O型FMDV血清抗体的检测。
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