【摘 要】
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目的:构建新生隐球菌的多聚泛素UBI4低表达菌株,检测UBI4低表达对新生隐球菌生长和毒力的功能影响。方法采用融合PCR方法,扩增含有UBI4基因的片段,将其与含有组蛋白启动子的质粒
【机 构】
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上海长征医院皮肤病与真菌病研究所全军真菌病重点实验室,第二军医大学附属长征医院皮肤科,上海市皮肤病医院
【基金项目】
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国家973项目(2013CB531601),上海市自然科学基金(12ZRl454400,12JCl411000),上海市医学真菌分子生物学实验室基金(14DZ2272900)
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目的:构建新生隐球菌的多聚泛素UBI4低表达菌株,检测UBI4低表达对新生隐球菌生长和毒力的功能影响。方法采用融合PCR方法,扩增含有UBI4基因的片段,将其与含有组蛋白启动子的质粒融合。通过基因枪将重组质粒片段转化入新生隐球菌,应用PCR筛选、DNA序列测序以及实时定量PCR方法对基因重建株进行鉴定与验证。检测多聚泛素UBI4低表达菌株对多种应激耐受力、生长曲线以及对蜡蛾感染的毒力影响。结果成功构建了新生隐球菌多聚泛素UBI4低表达。表型检测结果提示:较之标准株,UBI4低表达株生长速率下降,对高温、H
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