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为建立猪附红细胞体病的PCR-ELISA检测方法,试验根据猪附红细胞体ENO基因序列,设计合成1对分别标记生物素(BIOT)和地高辛(DIG)的引物,进行PCR-ELISA检测。通过对包被液的种类和浓度、结合抗体的反应条件、封闭条件、PCR产物的稀释度及显色时间等条件进行优化,确定阴性、阳性判定的阈值,并进行特异性、敏感性及重复性验证。结果表明:该方法与猪链球菌、猪大肠杆菌、猪肺炎支原体、弓形虫等均无交叉反应;敏感性比常规PCR高10倍,最低检出量为1.77×10^6拷贝/μL;对40份猪血液样