【摘 要】
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目的:对已构建的含有大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合基因的重组菌株进行鉴定和表达条件优化.方法:采用限制性核酸内切酶酶切鉴定含K88ac-ST1-LTB融合基因的重组质粒,同时用SDS-PAGE检测不同条件下K88ac-ST1-LTB融合基因的表达情况.结果:酶切鉴定证实重组质粒pETXKSL3含有K88ac-ST1-LTB融合基因且阅读框架正确.以IPTG为诱导剂诱导K88ac-ST1-L
【机 构】
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吉林化工学院环境与生物工程学院 吉林 132022 大连大学生物工程学院 大连 116622
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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目的:对已构建的含有大肠杆菌K88ac-ST1-LTB融合基因的重组菌株进行鉴定和表达条件优化.方法:采用限制性核酸内切酶酶切鉴定含K88ac-ST1-LTB融合基因的重组质粒,同时用SDS-PAGE检测不同条件下K88ac-ST1-LTB融合基因的表达情况.结果:酶切鉴定证实重组质粒pETXKSL3含有K88ac-ST1-LTB融合基因且阅读框架正确.以IPTG为诱导剂诱导K88ac-ST1-LTB融合基因表达的优化条件是:培养基pH 7.0,培养温度37℃,IPTG浓度1.0mmol/L,菌体生长密度OD600达到0.8时加入IPTG,诱导时间3h,此时K88ac-ST1-LTB融合蛋白表达量为35.2％.结论:实现K88ac-STI-LTB融合基因的高效表达,为大肠杆菌肠毒素双价基因工程菌苗的生产工艺研究提供了可靠的实验数据.
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