【摘 要】
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目的 筛选刚地弓形虫主要抗原B细胞表位并在原核表达载体中表达,对纯化的表位重组蛋白进行免疫反应性鉴定.方法 用计算机软件BioSun、DNAstar综合分析6个弓形虫主要抗原的亲
【机 构】
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江苏省无锡市第三人民医院,江苏省寄生虫病防治研究所
【基金项目】
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江苏省寄生虫分子生物学重点实验室;江苏省寄生虫病学重点学科开放课题
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目的 筛选刚地弓形虫主要抗原B细胞表位并在原核表达载体中表达,对纯化的表位重组蛋白进行免疫反应性鉴定.方法 用计算机软件BioSun、DNAstar综合分析6个弓形虫主要抗原的亲水性、可及性、柔韧性、二级结构、极性参数等,每一抗原分子预测2个最佳表位,设计合成24条共12对寡核苷酸,两端分别引入Noc Ⅰ、Xho Ⅰ酶切位点,退火形成的双链定向克隆至原核表达载体pET 32c中,EcoRⅠ单酶切鉴定重组质粒Epitope/pET-32c.将含有Epitope/pET-32c的BL21单菌落接种至LB肉汤培养基中培养,导入表达.表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫印迹试验(Western blot)分析重组表位蛋白与弓形虫抗原免疫血清的免疫反应性.结果 成功构建了12个原核表达质粒Epitope/pET-32c,并经测序证实,在E.coli BL21有11个表位基因能有效表达重组融合蛋白;纯化的表位蛋白大小均在20.0 kDa左右;Western blot结果显示表位蛋白SAG2-A、SAG3-B能被弓形虫抗原免疫血清识别,且反应较强,SAG2-B为弱阳性,其余的则不能被识别.结论 成功筛选到3个弓形虫B细胞表位基因,为进一步构建弓形虫复合表位抗原诊断弓形虫病奠定了基础.
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