【摘 要】
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通过生物信息学软件分析金黄色葡萄球菌转铁蛋白结合蛋白(StbA)的主要抗原表位区,PCR扩增StbA主要抗原表位区的编码序列;将该序列插入表达载体pGEX-4T-1中,测序验证后转化大
【机 构】
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贵阳医学院生物技术教研室; 贵州民族大学化学与环境科学学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31360084);贵州省科技厅社发项目(黔科合[2010]3144);贵州省卫生厅科学技术基金项目(gzwkj2011-1-018);贵阳医学院博士启动基金项目(K2010-32);贵州省科技厅科学技术基金项目(黔科J字[2010]2273)
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通过生物信息学软件分析金黄色葡萄球菌转铁蛋白结合蛋白(StbA)的主要抗原表位区,PCR扩增StbA主要抗原表位区的编码序列;将该序列插入表达载体pGEX-4T-1中,测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌能表达出分子质量约为54 000u的重组融合蛋白。表达产物经亲和层析纯化后可获得较高纯度的目的蛋白。Western-blot检测证实该重组蛋白能与乳腺炎患病奶牛恢复期血清发生阳性反应。ELISA结果显示,重组蛋白免疫新西兰大白兔能产生高效价的抗血清,提示StbA主要抗原表位区能刺激机体产生强大的免疫应答,StbA是一个有潜力的保护性抗原候选分子。
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