【摘 要】
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目的是通过虫荧光素酶N末端氨基酸的缺失,研究缺失对酶活性的影响.采用聚合酶链式反应的方法,构建虫荧光素酶N-末端缺失7,8,9个氨基酸残基的突变体,导入大肠杆菌DH5α菌株中
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目的是通过虫荧光素酶N末端氨基酸的缺失,研究缺失对酶活性的影响.采用聚合酶链式反应的方法,构建虫荧光素酶N-末端缺失7,8,9个氨基酸残基的突变体,导入大肠杆菌DH5α菌株中直接得到表达,再分离纯化粗酶,并检测酶活.结果表明,N末端缺失7个氨基酸的突变体几乎没有活性(小于天然活性的0.5%),N末端缺失8个以上氨基酸残基的突变体则完全丧失活性.由于N末端缺失6个氨基酸的突变体保持了77%的酶活性,因而萤火虫荧光素酶N末端第7个氨基酸与酶的催化活性密切相关.
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