【摘 要】
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以质粒pCWNF14为模板，采用PCR技术扩增出CYP3A4基因，并将其接入pET-22b（＋）、pET-28b（＋）和pET-32a（＋）载体中，经PCR测序鉴定后，转化Rosetta（DE3）2pLysS细菌，并用IPTG诱导表达．采用考马斯亮蓝染色
【机 构】
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汕头大学医学院中心实验室、广东省免疫病理学重点实验室,南方医科大学生物化学教研室
【基金项目】
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中国博士后科学基金资助项目（2005038187）,国家自然科学基金资助项目（30600733）
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以质粒pCWNF14为模板，采用PCR技术扩增出CYP3A4基因，并将其接入pET-22b（＋）、pET-28b（＋）和pET-32a（＋）载体中，经PCR测序鉴定后，转化Rosetta（DE3）2pLysS细菌，并用IPTG诱导表达．采用考马斯亮蓝染色的方法检测重组蛋白表达，3个表达重组质粒中，只有pET-32a（＋）-CYP3A4可以表达目的蛋白；在低浓度IPTG（50μmol／L）诱导6h，所表达的CYP3A4蛋白约占细菌总蛋白的40％。且该蛋白不溶于8mol／L的尿素，而溶于去污剂10mmol／L
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