人基质金属蛋白酶3基因RNA慢病毒载体构建及在人退变髓核细胞中的鉴定

来源 :中国组织工程研究 | 被引量 : 0次 | 上传用户:helen_fu
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背景:抑制椎间盘细胞外基质的降解可以延缓椎间盘退变的进程,基质金属蛋白酶3是降解Ⅱ型胶原和蛋白多糖细胞外基质成分的关键酶。目的:构建人基质金属蛋白酶3特异性shR NA重组慢病毒载体,感染人退变的髓核细胞,鉴定干扰效果。方法:根据基质金属蛋白酶3基因mR NA序列,设计4组靶向基质金属蛋白酶3基因的短发夹RNA序列,合成、退火形成双链DNA片段,与经过DNA内切酶Bam HⅠ、EcoRⅠ双酶切后的LV3载体连接转入感受态细胞,对长出的克隆进行菌落PCR鉴定,并对阳性克隆进行测序及比对分析。通过转染293T
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