【摘 要】
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目的从多发性肌炎/皮肌炎(polymyositis/dermatomyositis,PM/DM)患者外周血血清中分离鉴定外泌体(exosome),并进行初步的蛋白质研究。方法用Exo QuickTM试剂盒分离纯化PM/DM
【机 构】
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徐州医科大学医学技术学院,南京医科大学附属无锡第二人民医院检验科,南京医科大学附属无锡第二人民医院风湿科
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目的从多发性肌炎/皮肌炎(polymyositis/dermatomyositis,PM/DM)患者外周血血清中分离鉴定外泌体(exosome),并进行初步的蛋白质研究。方法用Exo QuickTM试剂盒分离纯化PM/DM患者血清exosome;透射电镜观察其形态特征,Nanosight可视型纳米颗粒分析仪检测粒径大小分布情况;western blot鉴定exosome的表面标志物CD9,CD81,Flotillin-2;BCA法对其所携带的蛋白质进行定量分析;十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析其蛋白质组分。结果透射电镜下患者血清exosome呈圆形或椭圆形膜性小囊泡,直径分布范围92±67 nm;western blot结果表明,PM/DM血清来源的exosome存在表面标志物CD9、CD81、Flotillin-2;BCA法测定PM/DM患者exosome总蛋白浓度为14.68(6.00,32.55)μg/μL,健康组exosome总蛋白浓度为14.09(8.00,23.28)μg/μL,SDS-PAGE显示两组血清exosome均在Mr(×103)为55~70处有高丰度蛋白质富集,在Mr(×10~3)为40~55处存在差异条带。结论成功从PM/DM患者的外周血中分离出血清exosome,并为寻找差异蛋白质提供实验依据。
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