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目的
探讨特发性肺纤维化中成纤维细胞对气道祖细胞增殖功能的调控。
方法制备β-肌动蛋白-绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)小鼠肺组织单细胞悬液,利用流式细胞术分选得到气道祖细胞;通过气道祖细胞与肺成纤维细胞共培养观察气道祖细胞的生长情况。TGF-β受体抑制剂SB431542处理成纤维细胞,测定成纤维细胞分泌生长因子1(fibroblast growth factor 1,FGF1)和成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor2,FGF2)的变化,观察FGF1/2对气道祖细胞生长的作用。
结果流式细胞术分选得到的气道祖细胞和正常人来源的肺成纤维细胞共培养,8 d后克隆形成率为(3.5±1.1)%;而气道祖细胞和特发性肺纤维化患者来源的肺成纤维细胞共培养时,克隆明显减少,克隆形成率仅(0.04±0.04)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。荧光显微镜下可见SB431542上调肺成纤维细胞分泌的生长因子FGF1/2的表达,FGF1 mRNA的表达量由对照组的0.000 2上调到实验组的0.005 5,FGF2 mRNA的表达量由对照组的0.000 8上调到实验组的0.001 5,FGF1/2均促进了气道祖细胞的生长。FGF1/2单独培养气道祖细胞,8 d后成功出现克隆,形成率为(0.3±0.1)%。
结论在特发性肺纤维化发展过程中,成纤维细胞分泌的生长因子FGF1/2调控气道祖细胞增殖。