【摘 要】
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目的 改良HPLC(AKTA 层析)系统,采用HPLC-MALLS 系统检测b 型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)精制多糖的分子大小分布及重均分子质量(Mw),并进行方法的验证
【机 构】
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沈阳药科大学,辽宁沈阳110016;北京民海生物科技有限公司,北京102600
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目的 改良HPLC(AKTA 层析)系统,采用HPLC-MALLS 系统检测b 型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)精制多糖的分子大小分布及重均分子质量(Mw),并进行方法的验证.方法 采用HPLC(AKTA层析)系统连接示差分析仪检测9批Hib精制多糖供试品的分配系数(KD)及KD值为0.5 的回收率(Rx).采用HPLC 连接18角度静态光散射分析系统MALLS(HPLC-MALLS)检测供试品的Mw、KD及Rx,并对两种系统的测试结果进行相关性分析;验证HPLC-MALLS 方法的重复性、准确性及定量限.结果 9 批供试品经AKTA 层析系统检测,KD为0.29～0.37,Rx 为78％～90％;经 HPLC-MALLS 系统检测,KD为0.31～0.38,Rx为84％～93％,Mw为(1.418～2.281)x 105 g/moL,两种系统检测同批供试品的KD值回归方程为Y = 0.903 X+0.051,r为0.978,表明检测结果具有显著相关性,两种方法等效.9批供试品经HPLC-MALLS/RI系统重复检测6次,Mw、KD及Rx的RSD均小于3.8％,多糖回收率及其RSD分别为80％～87％和0.05％～3.46％;定量限为1 mg/mL.结论 HPLC-MALLS 系统能与HPLC系统基本对接,在准确检测Hib精制多糖Mw 的同时还可检测KD及Rx,且方法的准确性及重复性良好,可作为检测Hib精制多糖分子大小的改良方法.
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