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目的：探讨人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）体外分离、培养、冻存、复苏与鉴定的可靠方法。方法：采用改良的胶原酶灌注消化法对HUVEC体外分离、培养，按慢冻速融原则对第3代细胞进行液氮冻存、复苏。采用免疫组化Ⅷ因子相关抗原染色和活体细胞荧光DiI-Ac-LDL鉴定。结果：分离的原代HUVEC总数平均为1×10^6个细胞，最多达3×10^6个细胞；两种鉴定结果HUVEC均为95％以上阳性；冻存后分3批复苏细胞活性均超过90％。结论：成功建立了人脐静脉血管内皮细胞体外培养、冻存、复苏与鉴定方