【摘 要】
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目的:探讨Claudin-6(CLDN6)在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的表达及其对卵巢颗粒细胞(GC)增殖与凋亡的影响和可能作用机制。方法:SD雌性大鼠皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)诱导建立PCOS模型,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法检测卵巢组织中CLDN6表达。分离培养原代PCOS大鼠卵巢GC,采用小分子干扰RNA(siRNA)技术和pcDNA3.1质
【基金项目】
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2019年度河南省医学科技攻关计划(联合共建)项目(No:LHGJ20190319);
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目的:探讨Claudin-6(CLDN6)在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的表达及其对卵巢颗粒细胞(GC)增殖与凋亡的影响和可能作用机制。方法:SD雌性大鼠皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)诱导建立PCOS模型,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法检测卵巢组织中CLDN6表达。分离培养原代PCOS大鼠卵巢GC,采用小分子干扰RNA(siRNA)技术和pcDNA3.1质粒转染下调/上调卵巢GC中CLDN6表达水平,RT-qPCR检测转染效果;CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力和凋亡;Western blot法检测细胞CLDN6、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路和增殖、凋亡相关蛋白的表达。结果:CLDN6在PCOS大鼠卵巢组织和GC中呈高表达。转染后,与空白组相比,对照组GC中CLDN6 mRNA和蛋白表达水平、GC活性、Cyclin D1、Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达显著升高,凋亡率、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);与对照组相比,si-CLDN6组GC中CLDN6 mRNA和蛋白表达水平、GC活性、Cyclin D1、Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达显著降低,凋亡率、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05),pcDNA3.1-CLDN6组GC中CLDN6 mRNA和蛋白表达水平、GC活性、Cyclin D1、Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达显著升高,凋亡率、Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);上调CLDN6表达基础上,ERK1/2抑制剂PD98059可明显减弱CLDN6高表达对GC增殖的促进作用和GC凋亡的抑制作用。结论:CLDN6在PCOS大鼠卵巢组织和GC中呈高表达,下调CLDN6可抑制PCOS大鼠卵巢GC增殖并诱导GC凋亡,其作用机制可能与抑制MAPK/ERK信号通路有关。
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