【摘 要】
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研究旨在探究a-酮戊二酸二甲酯(dimethyl α-ketoglutarate,DMKG)预处理对犬脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)抗氧化应激损伤的影响.以含0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/L过氧化氢(H2O2)的DMEM/F12基础培养基处理犬ADSCs,1h后采用CCK-8法检测细胞存活率,筛选最适浓度以建立犬ADSCs氧化应激模型.选取生长良好的P3代犬ADSCs分为3组,分别为空白对照组、模型组、D
【机 构】
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佛山科学技术学院生命科学与工程学院,佛山528231;广东维赛生物科技有限公司,佛山528231
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研究旨在探究a-酮戊二酸二甲酯(dimethyl α-ketoglutarate,DMKG)预处理对犬脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)抗氧化应激损伤的影响.以含0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/L过氧化氢(H2O2)的DMEM/F12基础培养基处理犬ADSCs,1h后采用CCK-8法检测细胞存活率,筛选最适浓度以建立犬ADSCs氧化应激模型.选取生长良好的P3代犬ADSCs分为3组,分别为空白对照组、模型组、DMKG组.空白对照组正常培养,不作处理;模型组使用最佳浓度的H2O2溶液处理犬ADSCs 1 h;DMKG组使用1 mmol/L DMKG预处理犬ADSCs 24 h后,使用最佳浓度的H2 O2溶液处理犬ADSCs 1 h.培养结束后,采用CCK-8法检测各组的细胞存活率,可见分光光度法检测还原型谷胱甘肽含量,荧光探针DCFH-DA检测活性氧水平,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、抗凋亡相关基因Bcl-2和促凋亡相关基因Bax、Cleaved-Cas pase的mRNA表达水平.结果 显示,与模型组相比,DMKG预处理能有效减少细胞内活性氧的产生(P＜0.05),增加细胞存活率(P＜0.01),并抑制细胞凋亡(P＜0.05);同时,DMKG预处理可增加还原型谷胱甘肽含量(P＜0.01),上调相关抗氧化酶基因SOD1、SOD2(P＜0.01)和CAT(P＜0.05),下调凋亡基因Cleaved-Caspase3的表达水平(P＜0.05),增加Bcl-2/Bax的比值(P＜0.05).综上所述,DMKG预处理可显著提高犬ADSCs抗氧化、抗凋亡的能力,从而增加犬ADSCs在氧化应激条件下的存活.
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