【摘 要】
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目的:观察腺病毒介导的反义AT1基因转染对培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响。方法:用定向克隆和同源重组方法构建携带人反义AT1基因的复制缺陷型重组腺病毒(AdCMV/
【机 构】
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郧阳医学院附属十堰市太和医院内科,郧阳医学院附属十堰市太和医院内科,郧阳医学院附属十堰市太和医院内科,郧阳医学院生命科学研究所,郧阳医学院生命科学研究所,郧阳医学院生命科学研究所,郧阳医学院解剖学教研
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目的:观察腺病毒介导的反义AT1基因转染对培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMCs)迁移的影响。方法:用定向克隆和同源重组方法构建携带人反义AT1基因的复制缺陷型重组腺病毒(AdCMV/ahAT1),转染体外培养的VSMCs,用RT-PCR半定量法和免疫组化法检测AT1R的表达,用改良趋化小室法检测细胞迁移。结果:与对照组相比转染AdCMV/ahAT1后48h的VSMCs,AT1RmRNA表达少50％,AT1R的蛋白表达也显著低下(P<0.01);迁移距离为(41.7±9.7)μm,显著短于空白对照组(77.5±12.7)μm和Ad/CMV.LacZ组(77.2±10.6)μm,均为P<0.01。结论:腺病毒介导的反义hAT1R转染,通过抑制AT1R的表达,明显抑制了大鼠VSMCs的迁移。
Objective: To observe the effect of adenovirus-mediated antisense AT1 gene transfection on the migration of cultured rat arterial smooth muscle cells (VSMCs). Methods: Recombinant adenovirus carrying human antisense AT1 gene (AdCMV / ahAT1) was constructed by directional cloning and homologous recombination. VSMCs cultured in vitro were transfected by semi-quantitative RT-PCR and immunohistochemistry AT1R expression, using a modified chemotaxis chamber assay cell migration. Results: Compared with the control group, AT1R mRNA expression was reduced by 50% and AT1R protein expression was significantly lower (P <0.01) than VSMCs transfected with AdCMV / ahAT1 at 48h, the migration distance was (41.7 ± 9.7) μm, which was significantly shorter than that of blank Control group (77.5 ± 12.7) μm and Ad / CMV.LacZ group (77.2 ± 10.6) μm, all P <0.01. CONCLUSION: Adenovirus-mediated antisense hAT1R transfection can significantly inhibit the migration of VSMCs in rats by inhibiting the expression of AT1R.
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