目的:构建含人p21启动子的双荧光素酶报告载体,感染肿瘤细胞后用于检测p53激活的抗肿瘤药物筛选。方法:从人血白细胞DNA中克隆p21启动子,用于控制Firefly荧光素酶的表达;Renilla荧光素酶基因和EGFP基因与IRES相连,在CMV启动子控制下表达;将上述元件和基因克隆至载体pLL3.7中,应用酶切和测序反应验证后再转染至U251和Eca109肿瘤细胞建立细胞检测模型。结果:成功构建含人p21启动子、大小约13kb的pLL3.7-Dluc重组质粒,经LipofecttamineTM转染后用于细胞药物筛选;采用MTT方法对8种不同药物对U251和Eca109细胞处理后进行IC50检测,其中姜黄素和丹参酮ⅡA在U251肿瘤细胞中的IC50分别为20和8μg/mL,Eca109细胞的IC50分别为12和25μg/mL;药物作用转染后U251细胞48h后作荧光素酶检测,计算F/R值并SPSS 13.0分析,姜黄素和丹参酮ⅡA的P值分别为0.003和0.024,药物作用后荧光检测结果显著;该实验在Eca109细胞模型中姜黄素和丹参酮ⅡA取得了一致性的结果,P值分别为0.001和0.015。人参皂苷Rb1与阴性对照组相比差异有统计学意义,P=0.022。结论:通过p21途径检测双荧光素酶基因的表达状况,提示姜黄素、丹参酮ⅡA和人参皂苷Rb1三种药物在U251和Eca109肿瘤细胞中具有使p53活性增加的功能。